血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）
衛(wèi)醫(yī)政發(fā)〔2012〕1號附件
二〇一二年一月
前 言
《中國輸血技術(shù)操作規(guī)程（血站部分》自1997年發(fā)布以來，對促進(jìn)血站規(guī)范化管理起到重要的作用。隨著輸血科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和血液管理工作要求的提高，原有內(nèi)容已經(jīng)不適應(yīng)當(dāng)前需要，為此衛(wèi)生部組織專家重新編制《血站技術(shù)操作規(guī)程（2012版）》（以下簡稱《規(guī)程》）。
本《規(guī)程》正文包括獻(xiàn)血者健康檢查、全血采集、血液成分制備、血液檢測、血液隔離與放行和質(zhì)量控制6個部分，對所涉及的關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn)做出相應(yīng)規(guī)定。其中一些原則性的規(guī)定，血站在制定自身的操作規(guī)程時應(yīng)當(dāng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)一步細(xì)化。以“宜”表述的內(nèi)容為推薦性內(nèi)容。
本《規(guī)程》的附錄為資料性附錄，供血站參考。
各血站應(yīng)當(dāng)按照國家相關(guān)法律、法規(guī)、規(guī)章、技術(shù)規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)，以及本《規(guī)程》的要求，結(jié)合具體工作實(shí)際，編制適合本血站使用的技術(shù)操作規(guī)程。
本《規(guī)程》自2012年6月1日起施行。
《中國輸血技術(shù)操作規(guī)程（血站部分）》（1997年）同時廢止。
目 錄
1 獻(xiàn)血者健康檢查
2 全血采集
3 血液成分制備
4 血液檢測
5 血液隔離與放行
6 質(zhì)量控制
附錄A 獻(xiàn)血者血紅蛋白檢測（硫酸銅目測法）
附錄B 血液檢測方法的確認(rèn)
附錄C 血液檢測試劑（酶聯(lián)免疫/核酸試劑）進(jìn)貨驗(yàn)收與放行記錄表
附錄D 血液檢測室內(nèi)質(zhì)控方法
附錄E 微板法ABO血型定型試驗(yàn)
附錄F 血液質(zhì)量控制檢查方法
附錄G 血袋標(biāo)簽確認(rèn)方法
1 獻(xiàn)血者健康檢查
1.1 目的
按照GB18467《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（以下簡稱《要求》）的規(guī)定，對具有獻(xiàn)血意向的潛在獻(xiàn)血者進(jìn)行健康檢查，對檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析和判斷，做出是否適合獻(xiàn)血的結(jié)論，保障獻(xiàn)血者健康和安全。
1.2 核對獻(xiàn)血者身份
將獻(xiàn)血者本人相貌與其有效身份證件原件核對。有效身份證件包括居民身份證、居民社會保障卡、駕駛證、軍（警）官證、士兵證、港澳通行證和臺胞證以及外國公民護(hù)照等。
1.3 登記獻(xiàn)血者身份信息
核查獻(xiàn)血者身份無誤后，將獻(xiàn)血者身份信息錄入血液管理信息系統(tǒng)（以下簡稱BMIS），具體錄入方式有：1）用身份證識讀器讀取身份信息并存入BMIS；2）在《獻(xiàn)血登記表》手寫登記，隨后手工錄入BMIS，注意核對信息填寫和輸入的正確性。
1.4 詢問和查詢既往獻(xiàn)血史
詢問獻(xiàn)血者和查詢BMIS有無既往獻(xiàn)血史。如獻(xiàn)血者曾獻(xiàn)血，獻(xiàn)血間隔期應(yīng)符合要求，不處于被暫時或永久屏蔽狀態(tài)。
1.5 履行告知義務(wù)
請獻(xiàn)血者仔細(xì)閱讀、理解獻(xiàn)血前須知內(nèi)容（見《要求》）。
1.6 健康征詢
請獻(xiàn)血者仔細(xì)閱讀、理解并如實(shí)回答獻(xiàn)血前健康征詢問題（見《要求》），體檢人員給予必要的指導(dǎo)和溝通。
1.7 知情同意
請獻(xiàn)血者簽名，表明獻(xiàn)血者已正確理解獻(xiàn)血前須知內(nèi)容并如實(shí)回答獻(xiàn)血前健康征詢問題，自主、自由地決定是否獻(xiàn)血。
1.8 一般檢查
按照《要求》規(guī)定，對獻(xiàn)血者進(jìn)行一般檢查，常規(guī)項(xiàng)目包括體重、血壓、脈搏等，必要時測量體溫。具體檢查方法見衛(wèi)生部《臨床護(hù)理實(shí)踐指南》。記錄健康檢查結(jié)果和結(jié)論并簽名。
1.9 獻(xiàn)血前血液檢測
在獻(xiàn)血前采集獻(xiàn)血者血液標(biāo)本做血液檢測。在采集血液標(biāo)本前應(yīng)核對獻(xiàn)血者身份。檢測項(xiàng)目包括血紅蛋白（Hb）和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）檢測。血紅蛋白檢測可采用目測法，如硫酸銅目測法（見附錄A）或試紙條比色法，必要時進(jìn)一步用儀器檢測。ALT采用干化學(xué)法/速率法記錄檢測結(jié)果和結(jié)論并簽名。
1.10 健康檢查結(jié)論
1.10.1 將獻(xiàn)血者健康征詢、一般檢查以及血液檢測的結(jié)果與《要求》的規(guī)定進(jìn)行對照分析和評價，做出獻(xiàn)血者是否符合獻(xiàn)血條件的判斷并簽名。
1.10.2 將健康檢查結(jié)果和結(jié)論與獻(xiàn)血者溝通。對于需要永久屏蔽獻(xiàn)血的，做好解釋工作；對于暫時不適宜獻(xiàn)血的，告知不適宜獻(xiàn)血的情形解除后，經(jīng)體檢合格可以獻(xiàn)血。
1.10.3 引導(dǎo)適合獻(xiàn)血的獻(xiàn)血者進(jìn)入血液采集環(huán)節(jié)。
2 全血采集
2.1 獻(xiàn)血場所配置
獻(xiàn)血場所的人員、設(shè)施、設(shè)備和器具、關(guān)鍵物料的配備按有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。
2.2 采血人員準(zhǔn)備
2.2.1 心理調(diào)適
采血人員調(diào)整好心理與情緒，進(jìn)入獻(xiàn)血者服務(wù)工作狀態(tài)，情緒穩(wěn)定，工作熱情，說話和氣，態(tài)度和藹，耐心細(xì)致。
2.2.2 技術(shù)準(zhǔn)備
熟悉采血技術(shù)操作規(guī)程，尤其應(yīng)注意關(guān)鍵控制點(diǎn)和近期變更的操作步驟。
2.2.3 著裝與配飾 采血人員著工作制服，不佩帶戒指、手鐲（鏈）等飾物。
2.2.4 手衛(wèi)生 采血人員保持手衛(wèi)生，具體操作按照《WS/T313 醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范》的規(guī)定執(zhí)行。
2.3 采血器材準(zhǔn)備
2.3.1 采血器材清單 建立采血器材卡片，列出采血位所需的全部器材。采血人員按卡片準(zhǔn)備和核查采血器材的種類和數(shù)量。采血器材的數(shù)量與預(yù)計采血量相適宜。一次性使用物品在有效期內(nèi)且包裝完好。采血器材準(zhǔn)備工作應(yīng)有專人復(fù)核。
2.3.2 血袋 1）無破損、無滲漏，無污染，抗凝劑和保養(yǎng)液無變色；2）處于有效期內(nèi)；3）宜采用具有留樣袋的血袋。
2.3.3 標(biāo)本管 1）帶有分離膠用于檢測病毒核酸的標(biāo)本管；2）用于酶聯(lián)免疫吸附法（以下簡稱ELISA）、ALT和血型檢測的標(biāo)本管。
2.3.4 消毒劑 1）一般選用含碘消毒劑，對碘過敏者可選用其他消毒劑；2）所用消毒劑應(yīng)當(dāng)符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)要求；3）處于有效期內(nèi)；4）標(biāo)明啟用日期。
2.3.5 采血儀（秤） 開啟并檢查采血儀（秤），證實(shí)正常運(yùn)行。
2.3.6 熱合機(jī) 開啟并檢查熱合機(jī)，證實(shí)處于正常狀態(tài)。
2.4 獻(xiàn)血者身份核對
2.4.1 在靜脈穿刺前，應(yīng)核對獻(xiàn)血者身份。
2.5 獻(xiàn)血者溝通與評估
2.5.1 在血液采集過程中應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)與獻(xiàn)血者的溝通，尤其是進(jìn)行每一項(xiàng)主要操作之前，應(yīng)當(dāng)與獻(xiàn)血者溝通并取得配合。
2.5.2 詢問獻(xiàn)血者的既往獻(xiàn)血經(jīng)歷、近日休息等情況，評估出現(xiàn)獻(xiàn)血不良反應(yīng)的可能性和不適合獻(xiàn)血的情況。
2.5.3 觀察獻(xiàn)血者面部表情和肢體語言，是否處于緊張、害怕甚至恐懼狀態(tài)。如發(fā)現(xiàn)這些不利情況，則不急于采血，做好寬慰工作，待獻(xiàn)血者解除思想顧慮，充分放松后開始準(zhǔn)備采血。
2.6 靜脈及其穿刺路徑評估與選擇
2.6.1 穿刺部位的選擇 應(yīng)選擇無損傷、炎癥、皮疹、皮癬、疤痕的皮膚區(qū)域?yàn)榇┐滩课弧?/p>
2.6.2 穿刺靜脈的選擇 1）選擇上肢肘部清晰可見、粗大、充盈飽滿、彈性好、較固定、不易滑動的靜脈；2）常選擇的靜脈主要有肘正中靜脈、頭靜脈、前臂正中靜脈、貴要靜脈等；3）用食指指腹上下左右觸摸，確定其位置、粗細(xì)和彈性，評估并確定穿刺位點(diǎn)和路徑；4）使用止血帶可使靜脈充盈，便于觸及和穿刺。
2.7 穿刺部位消毒
2.7.1 用無菌棉拭蘸取適量使用濃度消毒劑，以穿刺點(diǎn)為中心，自內(nèi)向外螺旋式旋轉(zhuǎn)涂拭，消毒面積不小于6 cm×8 cm。作用1～3 min 。宜消毒2～3遍。
2.7.2 不應(yīng)觸摸已消毒的皮膚，不應(yīng)靠近已消毒的皮膚講話。
2.8 靜脈穿刺
2.8.1 待消毒劑干后方可進(jìn)行靜脈穿刺。
2.8.2 采取相應(yīng)措施（如用止流夾夾住血袋導(dǎo)管）防止空氣進(jìn)入血袋。手持針柄，取下護(hù)針帽，按照預(yù)先選定的穿刺部位進(jìn)行穿刺。
2.8.3 穿刺路徑為自皮膚穿刺點(diǎn)進(jìn)入，皮下組織前行約0.5～1.0 cm，進(jìn)入靜脈腔，前行約0.5～1.0 cm。
2.8.4 如需第二次穿刺，應(yīng)當(dāng)在征得獻(xiàn)血者同意后，在另一手臂選擇穿刺部位和靜脈，使用新采血袋的采血針進(jìn)行穿刺。
2.9 血液采集和混勻
2.9.1 靜脈穿刺成功后，如果使用的帶留樣袋的采血袋，松開留樣袋夾子，使最先流出的血液流入留樣袋，約15～20 ml，用做血液檢測標(biāo)本。夾閉留樣袋夾子，松開阻塞件下端止流夾，使血液流入采血袋。如果使用不帶留樣袋的采血袋，松開夾子，使血液直接流入采血袋。
2.9.2 固定針頭位置，用敷料保護(hù)穿刺點(diǎn)。
2.9.3 維持靜脈穿刺點(diǎn)與血袋的落差，保持血流通暢。囑獻(xiàn)血者做握拳和松手動作，以促進(jìn)靜脈回流。血流不暢時，及時調(diào)整針頭位置。當(dāng)不易觀察血流時，應(yīng)注意觀察穿刺部位有無異常及血袋重量是否遞增。
2.9.4 血液開始流入采血袋后，即將其與抗凝劑輕勻混合。宜采用連續(xù)混合采血儀。如果采用手工混合，應(yīng)當(dāng)至少每90秒混合1次，充分混勻。
2.9.5 應(yīng)當(dāng)對采血時間進(jìn)行控制。200 ml全血采集時間＞5 min，或400 ml全血采集時間＞10 min，應(yīng)給予特殊標(biāo)識，所采集的全血不可用于制備血小板。200ml全血采集時間＞7 min，或400 ml全血采集時間＞13 min，所采集的全血不可用于制備新鮮冰凍血漿。
2.9.6 與獻(xiàn)血者進(jìn)行交流，觀察獻(xiàn)血者面容、表情，及時發(fā)現(xiàn)并處置獻(xiàn)血反應(yīng)。
2.10 采血結(jié)束和獻(xiàn)血者休息與觀察
2.10.1 采血量達(dá)到要求時，囑獻(xiàn)血者松拳，松開止血帶，合閉止流夾，用創(chuàng)可貼/消毒棉球/紗布輕按靜脈穿刺點(diǎn)，撥出針頭后即加重按壓，用彈力繃帶包扎，松緊度適中。
2.10.2 囑獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血者休息處用茶點(diǎn)，休息10～15 min。
2.10.3 如出現(xiàn)獻(xiàn)血不良反應(yīng)，按相應(yīng)程序處理。
2.11 獻(xiàn)血后注意事項(xiàng)的告知
2.11.1 應(yīng)當(dāng)印制獻(xiàn)血后注意事項(xiàng)，并將其發(fā)給每位獻(xiàn)血者。
2.11.2 獻(xiàn)血后注意事項(xiàng)主要有：1）穿刺點(diǎn)上的敷料應(yīng)保留至少4小時；2）多補(bǔ)充水分，食用易消化的食物和水果，避免飲酒，保證充足的睡眠；3）獻(xiàn)血后24小時內(nèi)不劇烈運(yùn)動、高空作業(yè)和過度疲勞；4）工作人員的聯(lián)系方式，如果存在獻(xiàn)血前沒有如實(shí)告知的可能影響血液安全的高危行為，或者獻(xiàn)血后感覺明顯不適或異常，請其及時聯(lián)系工作人員。
2.12 致謝
發(fā)給獻(xiàn)血者無償獻(xiàn)血證和紀(jì)念品，表示感謝，鼓勵定期獻(xiàn)血。
2.13 留取標(biāo)本
2.13.1 檢測結(jié)果用于判定血液能否放行的標(biāo)本只能在獻(xiàn)血時同步留取，不得在獻(xiàn)血者健康檢查時提前留取。
2.13.2 如果使用帶留樣袋的采血袋，將留樣針插入真空采血管，留取血樣。
2.13.3 如果使用不帶留樣袋的采血袋，將靜脈穿刺針插入真空采血管，留取血樣。應(yīng)單手操作，避免手被針頭刺傷。
2.13.4 將標(biāo)本管內(nèi)促凝劑或抗凝劑與血液充分混勻。
2.14 血袋及血液標(biāo)本標(biāo)識
2.14.1 一次只能對來源于同一獻(xiàn)血者的一份血袋、標(biāo)本管和獻(xiàn)血記錄進(jìn)行標(biāo)識。經(jīng)核對后，將惟一性條形碼標(biāo)識牢固粘貼在采血袋、標(biāo)本管、轉(zhuǎn)移袋、血袋導(dǎo)管、獻(xiàn)血記錄單上。
2.14.2 宜在標(biāo)本管與留樣針/靜脈穿刺針分離前開始標(biāo)識，對采血袋和標(biāo)本管的標(biāo)識應(yīng)當(dāng)首先連續(xù)完成，不應(yīng)中斷。
2.14.3 宜在標(biāo)本管與留樣針/靜脈穿刺針分離前核查采血袋、血液標(biāo)本、獻(xiàn)血登記表，所標(biāo)識的獻(xiàn)血條形碼應(yīng)一致。宜采用計算機(jī)程序進(jìn)行核查。
2.15 熱合
2.15.1 分段熱合血袋導(dǎo)管，以供交叉配血、血型復(fù)查和血液標(biāo)本保存使用。血袋應(yīng)保留注滿全血的導(dǎo)管至少20 cm。
2.15.2 在熱合過程中不應(yīng)用力牽拉或扭轉(zhuǎn)導(dǎo)管，待焊極松開1～2秒后方可取出已封口的導(dǎo)管。
2.15.3 應(yīng)檢查熱合部位，如有滲漏，則重新熱合，并評估對血液無菌性的影響。
2.15.4 熱合分離針頭，將其放置在利器盒內(nèi)。
2.16 血液保存
2.16.1 全血采集后應(yīng)盡快在合適的溫度下保存。
2.17 血液標(biāo)本處理和保存
2.17.1 核酸檢測標(biāo)本應(yīng)及時離心。
2.17.2 血液標(biāo)本采集后應(yīng)盡快處理，在合適的溫度下保存。
2.18 獻(xiàn)血現(xiàn)場整理
2.18.1 獻(xiàn)血相關(guān)信息應(yīng)及時錄入計算機(jī)管理信息系統(tǒng)。
2.18.2 盤點(diǎn)采集血液、標(biāo)本、獻(xiàn)血登記表數(shù)量，應(yīng)當(dāng)一一對應(yīng)，保證準(zhǔn)確無誤。
2.18.3 做好血液裝箱、運(yùn)輸和交接工作。
2.18.4 盤點(diǎn)物料消耗。
2.18.5 做好醫(yī)療廢物裝箱、運(yùn)輸和交接工作。
2.18.6 整理清潔現(xiàn)場，用消毒劑擦拭操作臺及采血器材，清潔地面。
3 血液成分制備
3.1 血液成分品種
3.1.1 血液成分品種見GB18469《全血及成分血質(zhì)量要求》。
3.2 制備環(huán)境
3.2.1 制備環(huán)境應(yīng)衛(wèi)生整潔，定期消毒。
3.2.2 應(yīng)盡可能以密閉系統(tǒng)制備血液成分。
3.2.3 用于制備血液成分的開放系統(tǒng)，制備室環(huán)境應(yīng)達(dá)到10000級、操作臺局部應(yīng)達(dá)到100級（或在超凈臺中進(jìn)行）。
3.2.4 制備需要冷藏的血液成分時，應(yīng)盡可能縮短室溫下的制備時間。
3.3 設(shè)備
3.3.1 設(shè)備數(shù)量及功能應(yīng)能滿足制備工作的要求。
3.3.2 應(yīng)建立和實(shí)施設(shè)備的確認(rèn)、維護(hù)、校準(zhǔn)和持續(xù)監(jiān)控等管理制度，實(shí)施惟一性標(biāo)識及使用狀態(tài)標(biāo)識，以確保設(shè)備符合預(yù)期使用要求。
3.4 物料
3.4.1 物料應(yīng)能滿足制備工作的需要。
3.4.2 物料質(zhì)量及其生產(chǎn)和供應(yīng)方的資質(zhì)應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)的要求。
3.4.3 物料使用前，應(yīng)檢查有效期、外觀質(zhì)量等，確認(rèn)符合質(zhì)量要求后方可使用。對不合格物料應(yīng)進(jìn)行標(biāo)識、隔離，防止誤用。
3.4.4 制備方法 制備新的血液品種或制備條件發(fā)生明顯改變時，應(yīng)對血液制備方法進(jìn)行確認(rèn)。
3.5 起始血液
3.5.1 用于制備血液成分的起始血液應(yīng)符合GB18469《全血及成分血質(zhì)量要求》的要求。
3.5.2 起始血液的保存和運(yùn)輸應(yīng)當(dāng)符合國家有關(guān)規(guī)定的要求。
3.5.3 接收起始血液時，應(yīng)核對數(shù)量，檢查外觀、血袋標(biāo)簽等內(nèi)容，確認(rèn)符合質(zhì)量要求后方可用于血液成分制備。
3.6 制備方法
3.6.1 離心
3.6.1.1 根據(jù)所制備血液成分要求和離心機(jī)操作手冊，確定離心轉(zhuǎn)速、加速和減速、離心時間和溫度等參數(shù)，編制離心程序。
3.6.1.2 制備血小板、粒細(xì)胞的離心溫度為22±2℃。
3.6.1.3 制備其他血液成分的離心溫度為4±2℃。
3.6.1.4 離心程序應(yīng)經(jīng)過確認(rèn)，應(yīng)能分離出符合質(zhì)量要求的血液成分。
3.6.1.5 對已經(jīng)投入常規(guī)使用的離心程序的變更實(shí)施控制，定期檢查核對，防止被非授權(quán)修改。
3.6.1.6 每批血液制備的離心記錄應(yīng)包括離心操作者簽名和所采用的離心程序。
3.6.2 分離
3.6.2.1 離心結(jié)束后，從離心機(jī)中取出離心杯，從離心杯中取出血袋，避免振動，進(jìn)行目視檢查，觀察離心效果、血袋及其導(dǎo)管有無滲漏，離心杯中有無血跡，如有破損應(yīng)查找滲漏點(diǎn)。血袋破漏的，應(yīng)作消毒和報廢處理。
3.6.2.2 將血袋置于分漿夾或血液分離機(jī)。將不同分層的血液成分轉(zhuǎn)移至密閉系統(tǒng)的轉(zhuǎn)移聯(lián)袋中，以最大限度收集目的成分（紅細(xì)胞、血小板、血漿等），并且使不需要的其他成分的殘留量最小的方式進(jìn)行分離和轉(zhuǎn)移。
3.6.3 速凍
3.6.3.1 速凍是保存凝血因子Ⅷ的關(guān)鍵加工步驟，冷凍速率和血漿中心溫度是2個關(guān)鍵參數(shù)。
3.6.3.2 應(yīng)當(dāng)使用專用設(shè)備，按操作說明書進(jìn)行冷凍操作。
3.6.3.3 應(yīng)當(dāng)將擬速凍的血袋逐袋平放，而不應(yīng)重疊堆放。
3.6.3.4 應(yīng)當(dāng)將新鮮冰凍血漿和冷沉淀凝血因子快速凍結(jié)，最好在60 min內(nèi)將血漿中心溫度降至-30℃以下。
3.7 標(biāo)識
3.7.1 使用聯(lián)袋制備時，在原袋和轉(zhuǎn)移袋分離之前，應(yīng)當(dāng)檢查每個血袋上獻(xiàn)血條碼的一致性。宜采用計算機(jī)系統(tǒng)進(jìn)行核對，以避免人為差錯。
3.7.2 需要連接新的血袋（過濾、分裝等）時，應(yīng)當(dāng)保證每一血袋獻(xiàn)血條碼一致。宜采用按需打印方式產(chǎn)生標(biāo)簽，粘貼完畢，經(jīng)計算機(jī)系統(tǒng)核對無誤后，才給予斷離。
3.7.3 應(yīng)當(dāng)對血液制備過程中發(fā)現(xiàn)的疑似不符合品進(jìn)行標(biāo)識和隔離，以進(jìn)一步調(diào)查和判斷。
3.8 目視檢查
3.8.1 在接收、離心、分離、熱合及交付的各個環(huán)節(jié)應(yīng)對每袋血液進(jìn)行目視檢查。
3.8.2 目視檢查內(nèi)容主要有：是否有滲漏、標(biāo)簽是否完整、血液外觀是否正常。
3.8.3 目視檢查發(fā)現(xiàn)異常的，應(yīng)給予標(biāo)識、隔離及進(jìn)一步處理。
3.9 質(zhì)量記錄
3.9.1 制備記錄主要有：血液交接、制備，設(shè)備使用與維護(hù)，制備環(huán)境控制，醫(yī)療廢物處理等。
3.9.2 制備記錄應(yīng)可追溯到起始血液、制備人員、制備方法、制備環(huán)境、使用設(shè)備和物料。
3.9.3 制備記錄宜以電子記錄為主，以手工紙面記錄為補(bǔ)充。
3.10 全血分離制備血液成分
3.10.1 多聯(lián)袋制備血液成分。
3.10.1.1 紅細(xì)胞和冰凍血漿的制備 1）第1次重離心后將盡可能多的血漿轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)移袋；2）將紅細(xì)胞保存液袋內(nèi)的紅細(xì)胞保存液轉(zhuǎn)移至紅細(xì)胞袋，充分混合即為懸浮紅細(xì)胞；3）核對血袋上的獻(xiàn)血條形碼，如一致則熱合斷離，生成1袋懸浮紅細(xì)胞和1袋血漿；4）血漿紅細(xì)胞混入量少（目視觀察）即可將血漿袋熱合斷離；5）如血漿紅細(xì)胞混入量較多，應(yīng)當(dāng)經(jīng)過第2次重離心后，把上清血漿轉(zhuǎn)移至已移空的紅細(xì)胞保存液袋，熱合斷離（如欲制備冷沉淀，則不熱合斷離）；6）將血漿速凍，低溫保存。
3.10.1.2 紅細(xì)胞、濃縮血小板和冰凍血漿的制備（富血小板血漿法）：1）第1次輕離心后將富含血小板血漿轉(zhuǎn)移至轉(zhuǎn)移袋；2）將紅細(xì)胞保存液袋內(nèi)的紅細(xì)胞保存液轉(zhuǎn)移至紅細(xì)胞袋；3）核對血袋上的獻(xiàn)血條形碼，如一致則熱合斷離，生成1袋懸浮紅細(xì)胞和1袋富血小板血漿；4）將富含血小板血漿袋重離心，上清為血漿，沉淀物為血小板；5）留取適量血漿，將多余的血漿轉(zhuǎn)移至已經(jīng)移空的紅細(xì)胞保存液袋，熱合斷離，生成1袋濃縮血小板和1袋血漿；6）將血漿袋速凍，低溫保存；7）將濃縮血小板袋在室溫靜置1～2小時，待自然解聚后，輕輕均勻血袋，制成濃縮血小板混懸液，在22±2℃的環(huán)境下振蕩保存。
3.10.1.3 紅細(xì)胞、濃縮血小板和冰凍血漿的制備（白膜法）：1）第1次重離心后，將血漿轉(zhuǎn)移至第1個轉(zhuǎn)移袋，將適量血漿及白膜層轉(zhuǎn)移至第2個轉(zhuǎn)移袋；2）將紅細(xì)胞保存液袋內(nèi)的紅細(xì)胞保存液轉(zhuǎn)移至紅細(xì)胞袋，充分混合即為懸浮紅細(xì)胞；3）核對血袋上的獻(xiàn)血條形碼，如一致則熱合斷離懸浮紅細(xì)胞袋和血漿袋；4）將白膜成分袋和1個空袋一起進(jìn)行輕離心，將富含血小板血漿（上層）轉(zhuǎn)移至空袋，制成濃縮血小板，熱合斷離，棄去白細(xì)胞袋。
3.10.2 冷沉淀凝血因子制備
3.10.2.1 用于制備冷沉淀凝血因子的起始血液為新鮮冰凍血漿。
3.10.2.2 離心法
3.10.2.2.1 取出待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿，置4±2℃冰箱中過夜融化或在4±2℃水浴裝置中融化。
3.10.2.2.2 當(dāng)血漿基本融化時，取出血漿，在4±2℃的環(huán)境下重離心。
3.10.2.2.3 將大部分上層血漿移至空袋，制成冰凍血漿。將留下的20～30ml血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。
3.10.2.3 虹吸法
3.10.2.3.1 將新鮮冰凍血漿袋置于4±2℃水浴裝置中，另一空袋懸于水浴箱外，位置低于血漿袋，兩袋之間形成一定的高度落差。
3.10.2.3.2 血漿融化后，隨時被虹吸至空袋中，當(dāng)融化至剩下40～50 ml血漿與沉淀物時，閉合導(dǎo)管，阻斷虹吸。將血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子。將冰凍血漿袋和冷沉淀凝血因子袋熱合斷離。
3.10.3 洗滌紅細(xì)胞制備
3.10.3.1 待用洗滌溶液聯(lián)袋提前放置冷藏保存，無破損滲漏，溶液外觀正常，在有效期內(nèi)。
3.10.3.2 將合格的紅細(xì)胞懸液用作制備洗滌紅細(xì)胞懸液的起始血液，無破損滲漏，血液外觀正常，在有效期內(nèi)。
3.10.3.3 使用無菌接合機(jī)將待洗滌的紅細(xì)胞懸液袋導(dǎo)管和洗滌溶液聯(lián)袋進(jìn)行無菌接合連通。
3.10.3.4 將洗滌溶液移至紅細(xì)胞袋內(nèi)，液體量約為100ml/單位，夾緊導(dǎo)管，混勻。
3.10.3.5 按照制備紅細(xì)胞的離心程序進(jìn)行離心操作。
3.10.3.6 離心后將血袋取出，避免震蕩，垂直放入分漿夾中，把上清液轉(zhuǎn)移至空袋內(nèi)，夾緊導(dǎo)管。
3.10.3.7 重復(fù)3.10.4～3.10.6步驟，洗滌3次。
3.10.3.8 將適量（50 ml/單位）保存液（生理鹽水或紅細(xì)胞保存液）移入已完成洗滌的紅細(xì)胞，混勻。
3.10.3.9 熱合，貼簽，入庫。
3.10.3.10 如果是在開放環(huán)境制備，應(yīng)嚴(yán)格遵從無菌操作。
3.10.3.11 如果在開放環(huán)境制備或最后以生理鹽水混懸，洗滌紅細(xì)胞保存期為24小時。如果是在閉合無菌環(huán)境中制備且最后以紅細(xì)胞保存液混懸，洗滌紅細(xì)胞保存期與洗滌前的紅細(xì)胞懸液相同。
3.10.4 去除白細(xì)胞
3.10.4.1 應(yīng)當(dāng)使用白細(xì)胞過濾技術(shù)去除全血或紅細(xì)胞懸液中的白細(xì)胞。
3.10.4.2 根據(jù)白細(xì)胞過濾器生產(chǎn)方說明書的要求進(jìn)行過濾操作。
3.10.4.3 應(yīng)當(dāng)在密閉環(huán)境（使用白細(xì)胞過濾多聯(lián)血袋或無菌接合技術(shù)）制備。
3.10.4.4 應(yīng)當(dāng)在采血后2天內(nèi)（采血次日為第1天）完成白細(xì)胞過濾。
3.10.4.5 檢查待濾過血液的外觀，并充分混勻后進(jìn)行過濾。
3.10.4.6 如果在進(jìn)行白細(xì)胞過濾操作前，血液已經(jīng)處于保存溫度（4 ±
2℃），需要在室溫進(jìn)行過濾時，室溫應(yīng)≤26℃，而且應(yīng)當(dāng)盡快放回至既定保存溫度的環(huán)境中，從取出到放回的時間應(yīng)＜3小時。
3.10.4.7 如果在白細(xì)胞過濾后，將血液轉(zhuǎn)移至不屬于原聯(lián)體血袋的其他血袋，應(yīng)當(dāng)建立與實(shí)施標(biāo)識控制機(jī)制，保證過濾后血液的正確標(biāo)識。
3.10.5 冰凍紅細(xì)胞
3.10.5.1 紅細(xì)胞甘油化
3.10.5.1.1 取擬冰凍保存的全血或懸浮紅細(xì)胞，離心去除上清液，用無菌接合技術(shù)將紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移至容量適當(dāng)?shù)�、適宜于冰凍保存的轉(zhuǎn)移袋內(nèi)。
3.10.5.1.2 在無菌條件下，緩慢滴加復(fù)方甘油溶液至紅細(xì)胞袋內(nèi)，邊加邊振蕩，使其充分混勻。
3.10.5.1.3 在室溫中靜置平衡30 min，置-65℃以下保存。
3.10.5.2 冰凍紅細(xì)胞的解凍 從低溫冷凍保存箱中取出冰凍紅細(xì)胞，立即放入37℃～40℃恒溫水浴箱中，輕輕振動使其快速融化，直至冰凍紅細(xì)胞完全解凍。
3.10.5.3 洗滌除去甘油 將專用洗滌鹽液袋與解凍紅細(xì)胞袋無菌接合，采取滲透壓梯度遞減方法洗滌。最后1次的洗滌上清液應(yīng)無明顯溶血跡象。
3.10.5.4 使用自動化設(shè)備制備冰凍和解凍紅細(xì)胞時，按照設(shè)備使用說明書進(jìn)行操作。
3.10.6 血漿病毒滅活 (亞甲藍(lán)光化學(xué)法)
3.10.6.1 根據(jù)設(shè)備操作說明書設(shè)置醫(yī)用血漿病毒滅活光照柜的參數(shù)。
3.10.6.2 根據(jù)血漿的規(guī)格選擇相應(yīng)病毒滅活血袋。
3.10.6.3 用無菌導(dǎo)管連接設(shè)備或百級凈化臺內(nèi)按無菌操作技術(shù)將血漿袋與病毒滅活血袋連接。
3.10.6.4 將血袋懸掛于支架上，打開導(dǎo)管夾，使血漿經(jīng)“亞甲藍(lán)添加元件”，流入光照袋。
3.10.6.5 在醫(yī)用血漿病毒滅活光照柜中進(jìn)行光照。
3.10.6.6 光照處理后的血漿經(jīng)病毒滅活裝置配套用輸血過濾器過濾，濾除亞甲藍(lán)和絕大部分白細(xì)胞，即得病毒滅活血漿。
3.10.7 血液輻照
3.10.7.1 輻照室應(yīng)符合《電離輻射防護(hù)與輻射源安全基本標(biāo)準(zhǔn)》的要求。
3.10.7.2 按照輻照儀使用說明書設(shè)置輻照參數(shù)。
3.10.7.3 血液輻照最低劑量為25 Gy，血液任何位點(diǎn)的輻照劑量不宜超過50 Gy。
3.10.7.4 紅細(xì)胞在采集后14天內(nèi)可輻照，輻照后可再儲存14天。
3.10.7.5 血小板在保存期內(nèi)均可輻照，輻照后可保存至從采集算起的正常保存期限。
3.10.7.6 粒細(xì)胞宜在采集后盡快輻照，輻照后宜盡快輸注。
3.10.7.7 在輻照過程中應(yīng)嚴(yán)格區(qū)分未輻照和已輻照血液的標(biāo)識。
3.10.7.8 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞和血漿不需輻照處理。
4 血液檢測
4.1 可經(jīng)輸血傳播感染的檢測項(xiàng)目及檢測方法
4.1.1 人類免疫缺陷病毒（HIV）感染標(biāo)志物及其檢測方法有2種選擇，可任選其中1種：1）采用2個不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測HIV-1和HIV-2抗體或聯(lián)合檢測HIV-1和HIV-2抗原和抗體；2）采用1種ELISA試劑檢測HIV-1和HIV-2抗體或聯(lián)合檢測HIV-1和HIV-2抗原和抗體，采用1種試劑檢測HIV核酸。
4.1.2 乙型肝炎病毒（HBV）感染標(biāo)志物及其檢測方法有2種選擇，可任選其中1種：1）采用2個不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測乙型肝炎表面抗原（HBsAg）；2）采用1種ELISA試劑檢測HBsAg，采用1種試劑檢測HBV核酸。
4.1.3 丙型肝炎病毒（HCV）感染標(biāo)志物及其檢測方法有2種選擇，可任選其中1種：1）采用2個不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測HCV抗體或聯(lián)合檢測HCV抗原和抗體；2）采用1種ELISA試劑檢測HCV抗體或聯(lián)合檢測HCV抗原和抗體，采用1種試劑檢測HCV核酸。
4.1.4 ALT采用2種方法（干化學(xué)法和速率法）進(jìn)行2次檢測，分別在采血前和采血后進(jìn)行。
4.1.5 梅毒螺旋體感染標(biāo)志物及其檢測方法：采用2個不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測梅毒特異性抗體。
4.2 血液檢測試劑
4.2.1 試劑選擇
4.2.1.1 應(yīng)建立血液檢測試劑的評價、選擇和確認(rèn)程序。
4.2.1.2 血液篩查試驗(yàn)的敏感性和特異性應(yīng)盡可能高。
4.2.1.3 有條件的實(shí)驗(yàn)室可自行開展試劑評價（見附錄B）。不具備條件的實(shí)驗(yàn)室可充分利用國家專業(yè)機(jī)構(gòu)（如中國食品藥品檢定研究院、中國疾病預(yù)防控制中心、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心等）的評價數(shù)據(jù)。
4.2.2 證照要求
4.2.2.1 應(yīng)建立血液檢測試劑證照審核程序，在采購前和驗(yàn)收時核實(shí)應(yīng)具備的有效證照文件。
4.2.2.2 采購藥品類檢測試劑應(yīng)索取以下加蓋供貨單位印章的資料存檔：1）《藥品生產(chǎn)許可證》或者《藥品經(jīng)營許可證》和營業(yè)執(zhí)照復(fù)印件；2）《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》或者《藥品經(jīng)營質(zhì)量管理規(guī)范》認(rèn)證證書復(fù)印件；3）藥品的批準(zhǔn)證明文件復(fù)印件；3）供貨單位藥品銷售委托書；4）銷售人員有效身份證明復(fù)印件；5）血源篩查試劑的批簽發(fā)文件；6）出廠質(zhì)量檢驗(yàn)報告。
4.2.2.3 采購醫(yī)療器械類檢測試劑應(yīng)索取以下加蓋供貨單位印章的資料存檔：1）《醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)許可證》或者《醫(yī)療器械經(jīng)營企業(yè)許可證》和營業(yè)執(zhí)照復(fù)印件，對生產(chǎn)、經(jīng)營屬于《醫(yī)療器械分類目錄》中第一類醫(yī)療器械的企業(yè)，只需索取營業(yè)執(zhí)照復(fù)印件；2）醫(yī)療器械注冊證書和《醫(yī)療器械注冊登記表》復(fù)印件；3）供貨單位醫(yī)療器械銷售委托書；4）銷售人員有效身份證明復(fù)印件；5）出廠質(zhì)量檢驗(yàn)報告。
4.2.3 進(jìn)貨檢查驗(yàn)收 應(yīng)建立并執(zhí)行進(jìn)貨檢查驗(yàn)收制度，檢查驗(yàn)收內(nèi)容主要有：1）驗(yàn)明藥品合格證明和其他標(biāo)識；2）外觀檢查（運(yùn)輸包裝箱完整無損，運(yùn)輸冷鏈符合要求，試劑包裝盒完整無損，無液體泄漏）；3）到貨數(shù)量和銷售憑證(購貨單位、試劑、供貨商等名稱，規(guī)格、批號、數(shù)量、價格）
4.2.4 隔離存放 應(yīng)將通過進(jìn)貨檢查驗(yàn)收后的試劑進(jìn)行隔離存放，防止誤用。
4.2.5 質(zhì)量抽檢
4.2.5.1 應(yīng)建立并執(zhí)行試劑的質(zhì)量抽檢制度，應(yīng)對每次購進(jìn)的試劑進(jìn)行質(zhì)量抽檢。
4.2.5.2 應(yīng)將試劑說明書列入文件控制范圍。應(yīng)對試劑說明書版本和內(nèi)容進(jìn)行檢查。其操作要求如已變更，實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)操作在試劑啟用時應(yīng)同時變更，嚴(yán)格控制未按試劑說明書進(jìn)行試驗(yàn)操作的情形發(fā)生。
4.2.5.3 試劑盒組成、組分性狀與說明書一致，無泄漏，足量，標(biāo)識正確。
4.2.5.4 用于質(zhì)量抽檢的樣本有：1）試劑盒對照；2）室內(nèi)質(zhì)控品；3）實(shí)驗(yàn)室自制或商品化的血清盤。前2種為必須，后1種為可選。
4.2.5.5 質(zhì)量抽檢結(jié)果要求：1）試劑盒對照品檢測結(jié)果符合試劑說明書要求，2）室內(nèi)質(zhì)控品檢測結(jié)果符合既定要求；3）如果適用，實(shí)驗(yàn)室自制或商品化的血清盤符合既定要求。
4.2.6 審核批準(zhǔn)
4.2.6.1 應(yīng)由授權(quán)人對采購驗(yàn)收和質(zhì)量抽檢的過程和結(jié)果進(jìn)行審核，批準(zhǔn)其用于血液檢測。
4.2.6.2 應(yīng)建立和保存試劑采購驗(yàn)收、質(zhì)量抽檢和審核批準(zhǔn)的記錄（見附錄C）。
4.2.7 試劑保存和質(zhì)量監(jiān)控
4.2.7.1 應(yīng)對經(jīng)批準(zhǔn)使用的試劑進(jìn)行標(biāo)識和放行，宜對試劑盒粘貼“可用”標(biāo)簽。
4.2.7.2 應(yīng)按試劑說明書要求的保存條件進(jìn)行保存，應(yīng)在有效期內(nèi)使用。
4.2.7.3 應(yīng)對試劑的庫存（批號、失效期、庫存量等）進(jìn)行管理，防止試劑過期或者中斷。
4.2.7.4 在試劑保存和使用過程中應(yīng)注意試劑性能出現(xiàn)衰減，如果試劑盒對照品和室內(nèi)質(zhì)控品的檢測值呈現(xiàn)連續(xù)走低趨勢且無法使其回升糾正，應(yīng)考慮終止使用。
4.3 儀器設(shè)備使用要求
4.3.1 新的或者經(jīng)過大修的檢測設(shè)備在正式投入正常使用之前應(yīng)經(jīng)過確認(rèn)。新設(shè)備的確認(rèn)應(yīng)包括安裝確認(rèn)、運(yùn)行確認(rèn)和性能確認(rèn)。經(jīng)過大修的設(shè)備根據(jù)需要進(jìn)行適當(dāng)確認(rèn)，必要時應(yīng)進(jìn)行計量檢定或校準(zhǔn)。
4.3.2 按照檢測設(shè)備用戶手冊要求進(jìn)行操作，包括使用、校準(zhǔn)、維護(hù)等工作。
4.3.3 如果使用多臺設(shè)備檢測同一個項(xiàng)目，應(yīng)對設(shè)備之間的性能和差異進(jìn)行比較。
4.3.4 應(yīng)定期檢查自動化檢測設(shè)備試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置，應(yīng)保存檢查記錄。
4.3.5 在試驗(yàn)過程中自動化檢測設(shè)備出現(xiàn)故障需要進(jìn)行手工操作時，應(yīng)注意自動化設(shè)備操作和手工操作的銜接及其對結(jié)果的影響。應(yīng)記錄手工操作步驟和操作者。
4.4 實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)
4.4.1 應(yīng)使用實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)對整個檢測過程（從標(biāo)本接收、試驗(yàn)、結(jié)果和結(jié)論判定）進(jìn)行信息化管理。
4.4.2 實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)的功能應(yīng)包括：1）標(biāo)本接收；2）試驗(yàn)項(xiàng)目選擇；3）試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄與匯總；4）試驗(yàn)數(shù)據(jù)的計算；5）試驗(yàn)結(jié)果的判定；6）血液篩查結(jié)論的判定；7）血液篩查結(jié)論傳輸至血液管理信息系統(tǒng)并為其所利用。
4.4.3 實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)運(yùn)行參數(shù)的設(shè)置應(yīng)建立權(quán)限控制。應(yīng)保存設(shè)置參數(shù)的書面記錄，并定期將其與實(shí)際設(shè)置參數(shù)對照，確保設(shè)置無誤，應(yīng)保存核實(shí)記錄。
4.5 血液檢測標(biāo)本
4.5.1 血液標(biāo)本的一般要求 1）標(biāo)本與血液、獻(xiàn)血者一一對應(yīng)；2）標(biāo)本質(zhì)量符合檢測項(xiàng)目技術(shù)要求；3）標(biāo)本信息具有可追溯性。
4.5.2 血液標(biāo)本采集與送檢程序的制定
4.5.2.1 本血站實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與血液標(biāo)本采集和送檢部門進(jìn)行充分溝通與協(xié)商，共同制定標(biāo)本采集和送檢程序，質(zhì)量管理部門應(yīng)予以審核。
4.5.2.2 血液集中化檢測的委托方和受托方應(yīng)進(jìn)行充分溝通與協(xié)商，共同制定標(biāo)本采集和送檢程序，雙方質(zhì)量管理部門應(yīng)予以審核，并經(jīng)雙方法定代表人批準(zhǔn)。
4.5.2.3 標(biāo)本采集和送檢程序的要點(diǎn)有： 1）標(biāo)本類型及檢測項(xiàng)目、標(biāo)本量、標(biāo)本管、標(biāo)本運(yùn)輸及包裝要求；2）標(biāo)本的惟一性標(biāo)識（條形碼）；3）標(biāo)本的質(zhì)量要求；4）標(biāo)本采集、送檢和接收；5）標(biāo)本信息和檢測報告信息的傳輸與接收，檢測報告時限；6）如為集中化檢測，檢測的委托方和受托方的標(biāo)識與聯(lián)系方式。
4.5.3 血液標(biāo)本管的選擇
4.5.3.1 應(yīng)根據(jù)每項(xiàng)試驗(yàn)的技術(shù)要求，采用相應(yīng)類型的真空采血管留取檢測標(biāo)本。試管應(yīng)無裂痕、無滲漏，容量應(yīng)滿足檢測項(xiàng)目要求。
4.5.3.2 將病毒核酸檢測結(jié)果列入血液放行依據(jù)的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)按照試劑說明書要求選擇合適的標(biāo)本管，最好采用含惰性分離膠的EDTAK2真空采血管留取核酸檢測標(biāo)本。
4.5.4 血液標(biāo)本的采集與標(biāo)識
4.5.4.1 應(yīng)對血液標(biāo)本采集前的準(zhǔn)備、標(biāo)本的采集、標(biāo)識、登記和保存過程實(shí)施有效控制，一次只對一袋血液和同源血液標(biāo)本管貼簽，確保標(biāo)本與血液、獻(xiàn)血者一一對應(yīng)，貼簽無誤。標(biāo)本質(zhì)量符合檢測項(xiàng)目技術(shù)要求。
4.5.4.2 檢測結(jié)果用于血液放行的血液標(biāo)本，應(yīng)在采集血袋血液的同時或者從血袋血液中留取。
4.5.4.3 血液標(biāo)本的采集與標(biāo)識的具體操作見本規(guī)程第2章全血采集。
4.5.5 血液標(biāo)本采集后的處理
4.5.5.1 可以電子或紙面方式登記標(biāo)本信息，應(yīng)進(jìn)行核對，防止信息錄入錯誤�？赏ㄟ^網(wǎng)絡(luò)、傳真或其它形式傳輸標(biāo)本信息。
4.5.5.2 核酸檢測標(biāo)本采集后，根據(jù)所采用的采血管和試驗(yàn)的技術(shù)要求實(shí)施離心。
4.5.5.3 血液標(biāo)本在采血現(xiàn)場的臨時保存溫度為2～10℃。
4.5.6 血液標(biāo)本包裝與運(yùn)輸
4.5.6.1 標(biāo)本應(yīng)隔離密封包裝，包裝材料應(yīng)滿足防水、防破損、防外泄、保持溫度、易于消毒處理。裝箱時應(yīng)保持標(biāo)本管口向上。
4.5.6.2 對于送交集中化檢測實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本的包裝要求主要有：1）可使標(biāo)本運(yùn)輸在過程中保持在2～10℃；2）外包裝有明確標(biāo)識（放置朝向、易碎）和交付接收雙方的聯(lián)系方式。
4.5.6.3 標(biāo)本應(yīng)在2～10℃條件下運(yùn)輸，應(yīng)對運(yùn)輸過程的冷鏈效果進(jìn)行確認(rèn)并定期監(jiān)測。
4.5.6.4 應(yīng)對標(biāo)本運(yùn)輸過程進(jìn)行記錄，其要點(diǎn)有：1）啟運(yùn)時間、地點(diǎn)；2）運(yùn)抵時間、地點(diǎn)；3）標(biāo)本箱編號、標(biāo)本類型、數(shù)量；4）運(yùn)輸包裝有無受損、有無泄漏；5）運(yùn)輸時間2小時以上的應(yīng)記錄箱內(nèi)溫度；6）標(biāo)本交運(yùn)人、承運(yùn)人；7）運(yùn)輸過程中發(fā)生的可能影響標(biāo)本質(zhì)量的意外事件及處理措施。
4.5.7 血液標(biāo)本的交接
4.5.7.1 接收時標(biāo)本應(yīng)核查：1）標(biāo)本來源、數(shù)量、采集時間；2）標(biāo)本采集管使用正確與否；3）標(biāo)本是否滿足既定的質(zhì)量要求；4）標(biāo)本與送檢單信息對應(yīng)性和完整性。
4.5.7.2 如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的標(biāo)本移出，對溢出標(biāo)本管和原包裝箱進(jìn)行消毒并記錄，必要時報告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和送檢單位。
4.5.7.3 應(yīng)拒收標(biāo)本的情形有：1）檢測申請關(guān)鍵信息缺失或不符；2）標(biāo)本管上無標(biāo)識或標(biāo)識不清、不正確；3）標(biāo)本管選用錯誤；4）標(biāo)本量不足或被稀釋；5）不符合試劑說明書要求的情形。
4.5.7.4 標(biāo)本交接雙方應(yīng)在標(biāo)本交接記錄簽名。
4.6 試驗(yàn)操作
4.6.1 按照試劑生產(chǎn)方提供的試劑使用說明書進(jìn)行操作。
4.6.2 如需對個別試驗(yàn)參數(shù)進(jìn)行修改，應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)。
4.6.3 宜采用自動化檢測設(shè)備操作標(biāo)本和試劑加樣以及試驗(yàn)過程。
4.6.4 自動化設(shè)備運(yùn)行參數(shù)的設(shè)置應(yīng)建立權(quán)限控制。應(yīng)保存設(shè)置參數(shù)的書面記錄，并定期將其與實(shí)際設(shè)置參數(shù)對照，確保設(shè)置無誤，應(yīng)保存核實(shí)記錄。
4.6.5 應(yīng)保存自動化檢測設(shè)備運(yùn)行記錄，并定期對運(yùn)行狀態(tài)進(jìn)行審核。
4.6.6 自動化檢測設(shè)備運(yùn)行時，如果需要人工輔助或干預(yù)，應(yīng)對實(shí)施人工輔助或干預(yù)的人員、人工輔助或干預(yù)的時間和內(nèi)容、與自動化檢測設(shè)備運(yùn)行的銜接等進(jìn)行記錄。
4.6.7 如果是采用手工操作標(biāo)本和試劑加樣或試驗(yàn)微孔板，應(yīng)完整記錄每一加樣和操作步驟。
4.7 試驗(yàn)性能監(jiān)控
4.7.1 一般要求
4.7.1.1 在血液篩查過程中，應(yīng)對試驗(yàn)性能持續(xù)進(jìn)行監(jiān)測，以發(fā)現(xiàn)正在發(fā)生的任何性能變化，這些變化如果沒有得到及時糾正，最終可能導(dǎo)致試驗(yàn)批次的失敗，或者弱陽性樣本的漏檢。
4.7.1.2 選擇能夠及時反映試驗(yàn)性能或試驗(yàn)應(yīng)用（試驗(yàn)或者試驗(yàn)操作者/操作系統(tǒng)）變化的1項(xiàng)或者多項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行監(jiān)測，以保證試驗(yàn)性能。這些參數(shù)包括：1）試驗(yàn)對照的檢測值；2）質(zhì)控品的檢測值；3）初、復(fù)試有反應(yīng)率及兩者的比例（復(fù)試有反應(yīng)性標(biāo)本數(shù)/初次試驗(yàn)有反應(yīng)性標(biāo)本數(shù)）。
4.7.1.3 應(yīng)當(dāng)根據(jù)質(zhì)控品的特性和用途加以選擇和使用。
4.7.1.4 作為試驗(yàn)有效性的外部對照應(yīng)具備：1）經(jīng)過國際（國家）標(biāo)準(zhǔn)溯源；2）以合適的基質(zhì)進(jìn)行稀釋；3）檢測標(biāo)志物含量接近檢測限（S/CO值為2～5）。
4.7.1.5 用于監(jiān)測試驗(yàn)穩(wěn)定性的質(zhì)控品，不要求經(jīng)過國際（國家）標(biāo)準(zhǔn)溯源。
4.7.1.6 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)盡可能使用質(zhì)控品。
4.7.1.7 質(zhì)控品所含目標(biāo)檢測物的濃度應(yīng)滿足實(shí)驗(yàn)要求。在日常使用前應(yīng)對質(zhì)控品的種類、規(guī)格、外觀、批號和效期進(jìn)行檢查。
4.7.1.8 質(zhì)控品應(yīng)與血液檢測標(biāo)本在相同的檢測條件下進(jìn)行檢測。如單一微板為一批試驗(yàn)，每一微板至少包括1份外部質(zhì)控品。
4.7.1.9 外部質(zhì)控品和內(nèi)部（試劑盒）對照不可相互替代。
4.7.1.10 外部質(zhì)控品的用途（用于判定試驗(yàn)有效性或監(jiān)控試驗(yàn)穩(wěn)定性）一經(jīng)確定，不應(yīng)隨意更改。
4.7.2 ELISA室內(nèi)質(zhì)控（參見附錄D）。
4.8 試驗(yàn)結(jié)果的判定
4.8.1 試驗(yàn)結(jié)果判定規(guī)則 應(yīng)制定明確的試驗(yàn)有效性和標(biāo)本試驗(yàn)結(jié)果判定規(guī)則，將其編寫或設(shè)置成為計算機(jī)程序，對其編寫、設(shè)置、修改和啟用應(yīng)進(jìn)行控制，所有修改均應(yīng)保存原版本，確保其具有可追溯性。
4.8.2 試驗(yàn)有效的判定
4.8.2.1 應(yīng)核查每批試驗(yàn)所使用的試劑、設(shè)備、試驗(yàn)過程、有無人工干預(yù)或其他非正常工作步驟出現(xiàn)等關(guān)鍵控制點(diǎn)，正確無誤后方可對試驗(yàn)有效性進(jìn)行判定
4.8.2.2 試劑盒各種試驗(yàn)對照的檢測值符合試劑說明書的要求，是判定試驗(yàn)有效的最低要求。
4.8.2.3 如果外部質(zhì)控品的檢測值是作為試驗(yàn)有效性的判定依據(jù)之一，其檢測值應(yīng)符合既定要求。
4.8.2.4 如果外部質(zhì)控品的檢測值是作為試驗(yàn)穩(wěn)定性的監(jiān)控，其檢測值應(yīng)符合既定范圍。如果超出既定范圍，按既定程序決定試驗(yàn)是否有效。
4.8.2.5 如果采用人工判定，應(yīng)詳細(xì)記錄每一判定依據(jù)，應(yīng)雙人核查。
4.8.2.6 如果判定一批試驗(yàn)無效，則該批試驗(yàn)所有標(biāo)本的檢測結(jié)果均為無效。
4.8.3 標(biāo)本試驗(yàn)結(jié)果計算和判定 判定試驗(yàn)有效后，按照試劑說明書的要求計算臨界值和灰區(qū)。根據(jù)標(biāo)本檢測值與臨界值的比較結(jié)果，判定為標(biāo)本檢測結(jié)論為無反應(yīng)性、有反應(yīng)性或不確定。
4.9 ELISA初次試驗(yàn)有反應(yīng)性標(biāo)本的重復(fù)試驗(yàn)
初次試驗(yàn)為有反應(yīng)性的檢測標(biāo)本的后續(xù)處理有2種選擇。
方案1：
以同一試驗(yàn)對原血樣（或從血袋導(dǎo)管重新取樣）做雙孔復(fù)試，如果雙孔復(fù)試結(jié)果均為無反應(yīng)性，其初試有反應(yīng)性可能由于假反應(yīng)性或技術(shù)誤差導(dǎo)致，檢測結(jié)論為無反應(yīng)性，血液可放行供臨床使用；如果雙孔復(fù)試結(jié)果中任何1孔為有反應(yīng)性，則檢測結(jié)論為有反應(yīng)性，對應(yīng)的血液及由其制備的所有成分應(yīng)隔離并報廢，將血液標(biāo)本轉(zhuǎn)送相關(guān)實(shí)驗(yàn)室做進(jìn)一步確證或補(bǔ)充試驗(yàn)(圖4-1)。
方案2：
不做重復(fù)試驗(yàn)，初次試驗(yàn)結(jié)論即為檢測最終結(jié)論(圖4-1)。
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無 |
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圖4-1 初次試驗(yàn)有反應(yīng)性的處理方案
4.10 核酸初次試驗(yàn)有反應(yīng)性的進(jìn)一步處理（見試劑說明書）
4.11 血型檢測
4.11.1 血型檢測項(xiàng)目 GB18469《全血及成分血質(zhì)量要求》規(guī)定的強(qiáng)制檢測項(xiàng)目有：1) ABO血型正確定型；2）RhD血型正確定型。
4.11.2 血型檢測方法 血型篩查常用方法有平板法和微板法、血型鑒定常用試管法和微板法。按照試劑說明書和《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）的規(guī)定進(jìn)行具體操作和質(zhì)量控制。附錄E提供了建立微板法一般方法，可供實(shí)驗(yàn)室自行建立微板法時參考。全自動化血型鑒定系統(tǒng)按照使用說明書進(jìn)行操作，投入使用前應(yīng)經(jīng)過充分確認(rèn)。如有必要，可增加血型基因檢測。
4.11.3 血型檢測結(jié)論
4.11.3.1 應(yīng)當(dāng)經(jīng)過2次檢測結(jié)果的比對，一致時才能做出血型檢測最終結(jié)論。
4.11.3.2 如果2次檢測結(jié)果不一致，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行細(xì)致審慎調(diào)查，發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致不一致的原因，正確無誤加以解決。
4.12 血液檢測最終結(jié)論的判定
4.12.1 血液檢測合格判定標(biāo)準(zhǔn) HIV、HBV、HCV、梅毒感染標(biāo)志物檢測的最終結(jié)論均為無反應(yīng)性，ABO/RhD血型正確定型，ALT測定值符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。
4.12.2 血液檢測不合格的判定標(biāo)準(zhǔn) 不符合4.12.1條規(guī)定的情形。
4.12.3 應(yīng)當(dāng)建立和實(shí)施血液檢測最終結(jié)論的計算機(jī)判定程序。如果需要人工判定，應(yīng)由雙人復(fù)核。
4.13 血液檢測結(jié)論的報告和利用
4.13.1 血液檢測最終結(jié)論是血液放行與否的依據(jù)。只有檢測合格的血液方可放行供臨床使用，檢測不合格的血液不得放行。
4.13.2 血液檢測最終結(jié)論應(yīng)以電子數(shù)據(jù)傳輸，并為計算機(jī)血液放行控制程序直接利用。
4.13.3 如果需要人工錄入血液檢測最終結(jié)論，或者需要人工放行，應(yīng)由雙人復(fù)核。
4.13.4 血液集中檢測的雙方應(yīng)明確血液檢測結(jié)論的報告和利用的方式、職責(zé)與分工。
4.13.5 發(fā)現(xiàn)血液檢測結(jié)論報告有誤，應(yīng)迅速啟動血液檢測報告和血液收回程序。
5 血液隔離與放行
5.1 血液隔離
5.1.1 待檢測、制備等尚未被判定合格的血液和不合格的血液應(yīng)被物理隔離，防止不合格血液的誤發(fā)放。
5.1.2 應(yīng)設(shè)立有明顯標(biāo)識的合格品區(qū)、隔離區(qū)和不合格品區(qū)。
5.1.3 設(shè)施設(shè)備應(yīng)衛(wèi)生、整潔，并定期清潔。
5.1.4 對血液隔離的貯存設(shè)備進(jìn)行溫度監(jiān)控。
5.1.5 進(jìn)出血液隔離區(qū)域的血液應(yīng)做好交接和記錄，記錄至少包括血型、品名、數(shù)量、時間、交接人及簽名等。
5.2 血液放行
5.2.1 經(jīng)過培訓(xùn)考核的被授權(quán)人員才能承擔(dān)放行工作，質(zhì)量管理人員對血液的放行進(jìn)行監(jiān)控，并留有監(jiān)控記錄。
5.2.2 確認(rèn)合格血液
5.2.2.1 對檢測不合格、外觀不合格、異常采集和符合保密性棄血等的血液，應(yīng)進(jìn)行標(biāo)識，并移入不合格品區(qū)。
5.2.2.2 將檢測報告中尚未最終判定結(jié)果的血液繼續(xù)隔離并做好標(biāo)識。
5.2.2.3 確認(rèn)檢測合格及血液外觀檢查合格的血液。
5.2.3 貼簽
5.2.3.1 制定程序，確保對合格血液正確貼簽。
5.2.3.2 一次只對一袋血液貼簽。
5.2.3.3 合格血液或合格血液制備的每一種血液成分只能印制惟一的合格血液標(biāo)簽。該合格血液標(biāo)簽印有惟一的條形碼。
5.2.3.4 需要復(fù)制惟一的合格血液標(biāo)簽，應(yīng)由被授權(quán)者確認(rèn)原先印制的合格血液標(biāo)簽已被銷毀。
5.2.3.5 通過惟一的條形碼可以追溯到獻(xiàn)血者、用血醫(yī)院以及血液采集、檢測、保存、發(fā)放等全過程記錄。
5.2.3.6 合格血液標(biāo)簽的內(nèi)容符合《血站質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。
5.2.3.7 粘貼標(biāo)簽前應(yīng)檢查確認(rèn)血袋無破損、無滲漏，血液外觀無異常。
5.2.3.8 標(biāo)簽粘合膠應(yīng)對血液質(zhì)量無影響。
5.2.3.9 粘貼合格血液標(biāo)簽后應(yīng)能清楚觀察血液外觀，并且不會影響血袋透氣性。
5.2.3.10 合格血液標(biāo)簽粘貼于血袋后應(yīng)再次確認(rèn)該標(biāo)簽粘貼無誤。
5.2.3.11 粘貼了合格血液標(biāo)簽的血液才能移入合格庫。
5.2.3.12 已經(jīng)放行進(jìn)入合格品庫的血液，再經(jīng)制備、分裝、轉(zhuǎn)換后，應(yīng)重新粘貼具有惟一性條形碼的合格血液標(biāo)簽，并保證粘貼無誤和可追溯性。
5.3 計算機(jī)控制
5.3.1 應(yīng)采用計算機(jī)管理信息系統(tǒng)控制血液隔離與放行。
5.3.2 需要人工放行時，應(yīng)建立與實(shí)施復(fù)核制度。
6 質(zhì)量控制
6.1 導(dǎo)則
6.1.1 范圍
質(zhì)量控制包括全血及血液成分質(zhì)量檢查、關(guān)鍵物料質(zhì)量檢查、關(guān)鍵設(shè)備質(zhì)量檢查和環(huán)境衛(wèi)生質(zhì)量檢查。
6.1.2 抽樣數(shù)量 全血及血液成分和關(guān)鍵物料質(zhì)量檢查的抽樣量為每月制備量的1%或至少4袋。若該成分血每月制備量少于4袋的，在保證質(zhì)量的前提之下，由血站自行制訂抽樣頻率和數(shù)量。
6.1.3 取樣方法 應(yīng)當(dāng)盡可能采用密閉系統(tǒng)進(jìn)行取樣。如果采用開放系統(tǒng)取樣，應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格無菌操作。取樣對血液質(zhì)量沒有構(gòu)成影響的，取樣后的血液可發(fā)放使用。
6.1.4 控制指標(biāo) 全血及血液成分的質(zhì)量控制指標(biāo)遵從GB18469《全血及成分血質(zhì)量要求》的規(guī)定，關(guān)鍵物料、關(guān)鍵設(shè)備和環(huán)境衛(wèi)生的質(zhì)量控制指標(biāo)遵從有關(guān)規(guī)定。
6.1.5 檢測機(jī)構(gòu) 血站可自行檢測，也可委托具備相應(yīng)檢測能力的檢測機(jī)構(gòu)（計量檢定機(jī)構(gòu)、血站、醫(yī)院、疾病預(yù)防控中心等）進(jìn)行檢測。
6.1.6 趨勢分析 應(yīng)當(dāng)對血液質(zhì)量控制抽檢結(jié)果進(jìn)行趨勢分析，出現(xiàn)異常趨勢時，應(yīng)當(dāng)組織有關(guān)部門實(shí)施調(diào)查和回顧，并采取相應(yīng)的改進(jìn)措施。進(jìn)行趨勢分析時，應(yīng)當(dāng)充分考慮到獻(xiàn)血者個體差異，對于由于獻(xiàn)血者個體差異所引起的，而且在血液采集和制備過程中難以控制的不影響血液安全性的指標(biāo)（見表6-1），如果有75%的抽檢結(jié)果落在質(zhì)量控制指標(biāo)范圍內(nèi)，可認(rèn)為血液采集和制備過程受控。
6.2 血液質(zhì)量控制
6.2.1 檢查項(xiàng)目 不同血液品種的質(zhì)量控制檢查項(xiàng)目見表6-1。
表6-1 血液質(zhì)量控制檢查項(xiàng)目
注1：“√”為適用檢查項(xiàng)目；注2：“ *”為適用于“75%的抽檢結(jié)果落在質(zhì)量控制指標(biāo)范圍內(nèi)，可認(rèn)為血液采集和制備過程受控”的檢查項(xiàng)目
6.2.2 檢查方法 質(zhì)量控制項(xiàng)目的具體試驗(yàn)方法見附錄F。
6.3 關(guān)鍵物料質(zhì)量檢查
6.3.1 一次性使用塑料采血袋質(zhì)量檢查
6.3.1.1 抽樣：每批至少隨機(jī)抽檢5袋（套）。
6.3.1.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
6.3.1.2.1 產(chǎn)品標(biāo)識：塑料采血袋標(biāo)記產(chǎn)品名稱、型式代號、采血袋（無采血袋時按轉(zhuǎn)移袋）公稱容量和國家標(biāo)準(zhǔn)編號組成。塑料采血袋分為單袋（S），雙聯(lián)袋（D），三聯(lián)袋（T），四聯(lián)袋（Q）和轉(zhuǎn)移袋（Tr）五種型式。如符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，采血袋公稱容量為400mL的雙聯(lián)袋（D）的產(chǎn)品標(biāo)記為：血袋D-400
6.3.1.2.2 系統(tǒng)密閉性：塑料采血袋的采血針、采血管、輸血插口必須連成一個完整的密閉系統(tǒng)，保證采集、分離、輸注和儲存血液時其內(nèi)腔不與外界空氣相接觸。
6.3.1.2.3 血袋袋體外觀：塑料采血袋袋體應(yīng)無色或微黃色，無明顯雜質(zhì)、斑點(diǎn)、氣泡。塑料采血袋內(nèi)外表面應(yīng)平整，在滅菌過程中和在溫度不超過40℃的貯存期內(nèi)不應(yīng)有粘連。塑料采血袋熱合線應(yīng)透明、均勻。采血管和轉(zhuǎn)移管內(nèi)外表面光潔，不應(yīng)有明顯條紋、扭結(jié)和扁癟。袋中的抗凝保存液及添加液應(yīng)無色或微黃色、無渾濁、無雜質(zhì)、無沉淀。
6.3.1.2.4 標(biāo)簽應(yīng)字跡清楚，項(xiàng)目齊全。標(biāo)簽應(yīng)有下列內(nèi)容：
1）血液保存液的名稱、配方和容量；
2）公稱容量（采血量）；
3）無菌有效期及不需通氣的說明；
4）“無菌”、“無熱原”限定條件的說明，“一次性使用”、“用后銷毀”字樣，使用說明，保存的血液條件；
5）注意事項(xiàng)：發(fā)現(xiàn)滲漏、長霉、混濁等變質(zhì)現(xiàn)象，禁止使用；
6）產(chǎn)品名稱和標(biāo)記；
7）生產(chǎn)廠家名稱、地址和商標(biāo)；
8）產(chǎn)品批號。
6.3.1.3 檢查方法：在光線明亮處，以目力檢查；以擠壓方式檢查系統(tǒng)密閉性。
6.3.1.4 物料檢驗(yàn)報告
所選用的血袋必須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每一批血袋必須有出廠檢驗(yàn)報告。
6.3.1.5 規(guī)格：必須符合使用要求。
6.3.1.6 有效期：被檢物料必須在有效期內(nèi)。
6.3.2 一次性無菌注射器質(zhì)量檢查
6.3.2.1 抽樣：每批至少隨機(jī)抽檢5支。
6.3.2.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
6.3.2.2.1 每個注射器的單包裝上應(yīng)有下列標(biāo)志：
1）生產(chǎn)廠家名稱或商標(biāo)；
2）產(chǎn)品名稱及規(guī)格；
3）生產(chǎn)批號及有效期；
4）一次性使用；
5）包裝如有破損禁止使用；
6）若帶注射針頭，應(yīng)注明規(guī)格；
7）“無菌”、“無熱原”字樣。
6.3.2.2.2 外觀：注射器應(yīng)清潔、無微粒和異物。注射器外套必須有足夠的透明度，能毫無困難地讀出劑量，能清晰地看到基準(zhǔn)線。
6.3.2.2.3 潤滑：注射器應(yīng)有良好的潤滑性能。注射器的內(nèi)表面（包括橡膠活塞），不得有明顯可見的潤滑劑匯聚。
6.3.2.3 檢查方法：在光線明亮處，以目力檢查。
6.3.2.4 物料檢驗(yàn)報告
所選用的注射器必須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每一批注射器必須有出廠檢驗(yàn)報告。
6.3.2.5 規(guī)格：必須符合使用要求。
6.3.2.6 有效期：被檢物料必須在有效期內(nèi)。
6.3.3 一次性使用去白細(xì)胞濾器質(zhì)量檢查
6.3.3.1 抽樣：每批至少隨機(jī)抽檢5套。
6.3.3.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
6.3.3.2.1 外觀：去白細(xì)胞濾器外殼應(yīng)光潔，無明顯機(jī)械雜質(zhì)、異物，焊接面應(yīng)均勻、無氣泡，軟管應(yīng)柔軟、透明、光潔，無明顯機(jī)械雜質(zhì)、異物、扭結(jié)。
6.3.3.2.2 每個單包裝上應(yīng)有以下內(nèi)容：
1）產(chǎn)品名稱、規(guī)格；
2）使用符號或文字標(biāo)明去白細(xì)胞濾器無菌、無熱原；
3）批號及失效日期；
4）標(biāo)明適用范圍的產(chǎn)品標(biāo)記；
5）制造商和/或經(jīng)銷商名稱、地址；
6）單包裝內(nèi)不應(yīng)有肉眼可見異物。
6.3.3.3檢查方法：在光線明亮處，以目力檢查。
6.3.3.4 物料檢驗(yàn)報告
所選用的去白細(xì)胞濾器必須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每一批去白細(xì)胞濾器必須有出廠檢驗(yàn)報告。
6.3.3.5 規(guī)格：必須符合使用要求。
6.3.3.6 有效期：被檢物料必須在有效期內(nèi)。
6.3.4 一次性使用病毒滅活輸血過濾器質(zhì)量檢查
6.3.4.1 抽樣：每批至少隨機(jī)抽檢5套。
6.3.4.2質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
6.3.4.2.1 外觀：病毒滅活輸血過濾器的軟管應(yīng)光潔，無明顯機(jī)械雜質(zhì)、異物、扭結(jié)。過濾部件、亞甲藍(lán)添加元件外殼應(yīng)光潔，無明顯機(jī)械雜質(zhì)、異物，焊接面應(yīng)均勻、無氣泡。
6.3.4.2.2 每個單包裝上應(yīng)有以下內(nèi)容：
1）產(chǎn)品名稱、規(guī)格；
2）使用符號或文字標(biāo)明病毒滅活輸血過濾器無菌、無熱原；
3）批號及失效日期；
4）標(biāo)明適用范圍的產(chǎn)品標(biāo)記；
5）制造商和/或經(jīng)銷商名稱、地址；
6）單包裝內(nèi)不應(yīng)有肉眼可見異物。
6.3.4.3 檢查方法：在光線明亮處，以目力檢查。
6.3.4.4 物料檢驗(yàn)報告
所選用的病毒滅活輸血過濾器必須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每一批病毒滅活輸血過濾器必須有出廠檢驗(yàn)報告。
6.3.4.5 規(guī)格：必須符合使用要求。
6.3.4.6 有效期：被檢物料必須在有效期內(nèi)。
6.3.5 一次性單采耗材質(zhì)量檢查
6.3.5.1 抽樣：每批至少隨機(jī)抽檢5套。
6.3.5.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
6.3.5.2.1 外觀：包裝完整，標(biāo)識清晰。
6.3.5.2.2 每個單包裝上應(yīng)有以下內(nèi)容：
1）產(chǎn)品名稱、規(guī)格；
2）使用符號或文字標(biāo)明無菌、無熱原；
3）批號及失效日期；
4）標(biāo)明適用范圍的產(chǎn)品標(biāo)記；
5）制造商和/或經(jīng)銷商名稱、地址。
6.3.5.3檢查方法：在光線明亮處，以目力檢查。
6.3.5.4 物料檢驗(yàn)報告
所選用的單采耗材必須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每一批單采耗材必須有出廠檢驗(yàn)報告。
6.3.5.5 規(guī)格：必須符合使用要求
6.3.5.6 有效期：被檢物料必須在有效期內(nèi)。
6.3.6 血袋標(biāo)簽質(zhì)量檢查
6.3.6.1 抽樣：每批至少隨機(jī)抽檢5張。
6.3.6.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)簽的底色應(yīng)為白色，標(biāo)簽應(yīng)潔凈、無破損，字跡清楚；標(biāo)簽上文字一般為實(shí)體黑色字體。
6.3.6.3 檢查方法：在光線明亮處，以目力檢查。
6.3.6.4 物料檢驗(yàn)報告
所選用的血袋標(biāo)簽必須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每一批血袋標(biāo)簽必須有出廠檢驗(yàn)報告。
6.3.6.5 規(guī)格：必須符合使用要求。
6.3.6.6 擬采用新的供應(yīng)方所提供的標(biāo)簽的確認(rèn)方法參見附錄G。
6.3.7 硫酸銅溶液質(zhì)量檢查
6.3.7.1 抽樣
6.3.7.1.1 自配硫酸銅溶液：每周檢測一次。
6.3.7.1.2 外購成品硫酸銅溶液：每批至少隨機(jī)抽檢5套。
6.3.7.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
6.3.7.2.1 自配硫酸銅溶液
用于男性獻(xiàn)血者血比重檢查的硫酸銅溶液比重，在20℃時應(yīng)為1.0520，允許誤差為±0.0005。用于女性獻(xiàn)血者血比重檢查的硫酸銅溶液比重，在20℃時應(yīng)為1.0510，允許誤差為±0.0005。
6.3.7.2.2 外購成品硫酸銅溶液
用于男性獻(xiàn)血者血比重檢查的硫酸銅溶液比重，在溶液允許的使用溫度范圍時應(yīng)為1.0520，允許誤差為±0.0005。用于女性獻(xiàn)血者血比重檢查的硫酸銅溶液比重，在溶液允許的使用溫度范圍時應(yīng)為1.0510，允許誤差為±0.0005。
6.3.7.3 檢測方法：見《中華人民共和國藥典》（2010年版）二部 附錄 “韋氏比重秤法”。
6.3.7.4 物料檢驗(yàn)報告
所選用的硫酸銅溶液必須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每一批外購硫酸銅溶液必須有出廠檢驗(yàn)報告。
6.3.7.5 規(guī)格：必須符合使用要求。
6.3.7.6 有效期：被檢物料必須在有效期內(nèi)。
6.3.8 真空采血管質(zhì)量檢查
6.3.8.1 抽樣：每批至少隨機(jī)抽檢5支。
6.3.8.2 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
試管上的標(biāo)志、標(biāo)簽應(yīng)清晰。試管應(yīng)無色透明、光滑、平整，正常視力能清楚觀察到試管內(nèi)血樣；不得有明顯變形、沙眼、氣泡、雜質(zhì)等。
6.3.8.3 檢查方法：在光線明亮處，以目力檢查。
6.3.8.4 物料檢驗(yàn)報告
所選用的真空采血管必須符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，每一批真空采血管必須有出廠檢驗(yàn)報告。
6.3.8.5 規(guī)格：必須符合使用要求。
6.3.8.6 有效期：被檢物料必須在有效期內(nèi)。
6.3.9 檢驗(yàn)試劑質(zhì)量檢查
6.3.9.1 檢驗(yàn)試劑包括：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、艾滋病病毒抗體診斷試劑盒、梅毒抗體診斷試劑盒、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒、血型試劑盒、快速篩查試劑盒等。
6.3.9.2 檢驗(yàn)報告
對于國家進(jìn)行批批檢的試劑盒，必須有國家批批檢報告。國家不進(jìn)行批批檢的試劑，以生產(chǎn)廠商出具的出廠檢驗(yàn)報告為準(zhǔn)。
6.3.9.3 外觀檢查：每批抽檢5盒試劑盒。試劑盒包裝應(yīng)完整，標(biāo)識清晰，試劑齊全無滲漏。
6.3.9.4 運(yùn)輸要求
試劑運(yùn)送途中的溫度必須符合試劑說明書要求，供應(yīng)商必須提供試劑運(yùn)輸冷鏈監(jiān)控溫度記錄。
6.3.9.5 有效期：被檢試劑必須在有效期內(nèi)。
6.4 關(guān)鍵設(shè)備質(zhì)量檢查
6.4.1 強(qiáng)制檢定設(shè)備和校準(zhǔn)設(shè)備
必須定期對關(guān)鍵設(shè)備進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)，除國家強(qiáng)制檢定設(shè)備外，其余設(shè)備血站可以依據(jù)國家計量檢定規(guī)程，由經(jīng)培訓(xùn)具有資質(zhì)的質(zhì)控人員自行進(jìn)行，或委托相關(guān)計量機(jī)構(gòu)/生產(chǎn)廠商進(jìn)行。
6.4.2 血站自行監(jiān)測設(shè)備
6.4.2.1 成分制備大容量離心機(jī)質(zhì)量檢查
6.4.2.1.1 檢查頻率：每年監(jiān)測1～2次，由血站自行或委托離心機(jī)廠商進(jìn)行。
6.4.2.1.2 離心溫度
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：規(guī)定溫度±1℃。
檢測方法：于離心機(jī)工作間隙，把經(jīng)計量部門標(biāo)定的溫差電偶溫度計的探頭放入離心腔內(nèi)，蓋好離心機(jī)蓋。10分鐘后觀察離心機(jī)溫度表顯示的溫度與溫差電偶溫度計顯示溫度的差值。
6.4.2.1.3 離心時間
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：規(guī)定時間±20s。
檢測方法：使用秒表對離心機(jī)的時間控制進(jìn)行檢查。把時間控制表調(diào)至規(guī)定時間，同時啟動秒表，觀察離心機(jī)時間控制表從開始計時到計時停止秒表所用的時間。即為時間控制表按規(guī)定時間計時所用的實(shí)際時間。
6.4.2.1.4 離心轉(zhuǎn)速
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：規(guī)定轉(zhuǎn)速±50r/min。
檢測方法：打開離心機(jī)前面板，在連接離心轉(zhuǎn)頭軸上貼一張反光標(biāo)簽。把轉(zhuǎn)速控制調(diào)到規(guī)定轉(zhuǎn)速值，然后啟動離心機(jī)待轉(zhuǎn)速穩(wěn)定后，用轉(zhuǎn)速儀的光束照明反光標(biāo)簽，觀察轉(zhuǎn)速儀顯示屏上的轉(zhuǎn)速值。或采用其它適宜的方法檢測。
注意事項(xiàng)：為保證檢查人員的安全，檢測時距轉(zhuǎn)速儀的測量距離不得小于20cm。
6.4.2.2 儲血設(shè)備質(zhì)量檢查
6.4.2.2.1 檢查頻率：每月至少一次。
6.4.2.2.2 溫度
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)： 儲血設(shè)備的溫度應(yīng)在規(guī)定范圍內(nèi)，各儲血設(shè)備的儲存溫度見下表。
儲血設(shè)備溫度標(biāo)準(zhǔn)
|
設(shè)備種類 |
溫度（℃） |
|
儲血冷藏箱（庫） |
2～6 |
|
血小板溫箱（室） |
20～24 |
|
低溫冰箱（庫） |
-25以下 |
|
速凍冰箱 |
-50以下 |
|
超低溫冰箱 |
-65以下 |
檢測方法：使用經(jīng)計量部門標(biāo)定的溫差電偶溫度計（精確度為0.1℃）測定儲血設(shè)備箱內(nèi)的溫度。具體布點(diǎn)方式見YY/T0168－2007《血液冷藏箱》。
6.4.2.2.3 電源故障報警系統(tǒng)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：電源發(fā)生故障時，報警系統(tǒng)應(yīng)立即以聲/光方式發(fā)出警報。
檢測方法：切斷儲血設(shè)備的電源或開啟報警測試按鈕，模擬電源發(fā)生故障，此時報警系統(tǒng)以聲/光方式發(fā)出警報。或使用其它適宜的方法檢測。
6.4.2.2.4 溫度失控報警系統(tǒng)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)儲血設(shè)備的溫度超出質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)范圍時，報警系統(tǒng)應(yīng)以聲/光方式發(fā)出報警。
檢測方法：將儲血設(shè)備的報警范圍分別調(diào)至低于和高于儲血設(shè)備溫度時，報警系統(tǒng)應(yīng)以聲/光方式發(fā)出報警。
6.4.2.3 壓力蒸氣滅菌器質(zhì)量檢查
6.4.2.3.1 檢查頻率：每周檢查一次。
6.4.2.3.2 檢測方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：可采用化學(xué)指示劑法或生物指示劑法進(jìn)行滅菌效果監(jiān)測，具體檢測方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)見《消毒技術(shù)規(guī)范》 “壓力蒸氣滅菌效果的監(jiān)測方法”。
6.4.2.4 采血秤質(zhì)量檢查
6.4.2.4.1 檢查頻率
根據(jù)采血秤的使用頻率制定相應(yīng)檢測頻率，每半年至少一次。
6.4.2.4.2 混勻器搖動頻率
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：30～32次/分（進(jìn)口采血秤見生產(chǎn)廠商說明書）。
檢查方法：開啟采血秤混勻器后，使用秒表計時，觀察1分鐘內(nèi)混勻器搖動次數(shù)，搖動一個循環(huán)為一次。
6.4.2.4.3 稱量準(zhǔn)確度
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)示量±2%。
檢查方法：開啟采血秤，將標(biāo)準(zhǔn)砝碼（模擬常規(guī)血液采集的重量）置于采血秤上，觀察采血秤顯示的數(shù)值。
6.4.2.4.4 報警功能
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：采血袋中采血量到規(guī)定量時指示燈應(yīng)閃光或蜂鳴器應(yīng)發(fā)音報警。
檢查方法：將標(biāo)準(zhǔn)砝碼或經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)砝碼標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)量模擬血袋置采血秤上時，采血秤的聲或光提示報警應(yīng)啟動。
附錄A
獻(xiàn)血者血紅蛋白檢測（硫酸銅目測法）
A.1 試驗(yàn)原理
全血滴入標(biāo)準(zhǔn)硫酸銅溶液中，形成一層銅蛋白膜，包圍在血滴外層。觀察全血在已知相對密度（比重）硫酸銅溶液中沉浮情況，可判定其相對密度（比重），從而確定其血紅蛋白濃度。
A.2 試劑
A.2.1 用于男性獻(xiàn)血者（Hb≥120g/L）檢測的硫酸銅溶液比重為1.0520。
A.2.2 用于女性獻(xiàn)血者（Hb≥115g/L）檢測的硫酸銅溶液比重為1.0510。
A.2.3 不同用途試劑瓶標(biāo)識應(yīng)便于區(qū)分
A.2.4 采用商品化硫酸銅試劑的，按試劑說明書規(guī)定的條件儲存，在有效期內(nèi)使用。
A.2.5 硫酸銅溶液也可自行配制，配制方法見A.5，應(yīng)保存配制記錄。
A.2.6 硫酸銅溶液比重隨溫度變化而變化的，溫度每上升2℃，比重下降0.0005。在配制和使用時應(yīng)注意這一特性。
A.2.7 每瓶（50 ml）硫酸銅溶液的可用于檢測25人次。
A.3 標(biāo)本要求
A.3.1 新鮮采集的末梢血或靜脈血，抗凝或不抗凝血液均可使用。
A.3.2 陳舊、溶血和嚴(yán)重乳糜的血液不可用來試驗(yàn)。
A.4 操作步驟和結(jié)果判斷
A.4.1 常規(guī)采集手指末梢血或靜脈血。
A.4.2 在距硫酸銅液面上方1cm處垂直將1滴血液輕輕滴入，血滴應(yīng)不含氣泡。
A.4.3 在15秒內(nèi)肉眼觀察，判斷結(jié)果：1）血滴很快下沉于瓶底，表明血液比重大于硫酸銅溶液比重，血紅蛋白含量符合獻(xiàn)血標(biāo)準(zhǔn)；2）血滴在硫酸銅溶液中部懸浮10 -15秒后下沉于瓶底，表明血液比重等于硫酸銅溶液比重，血紅蛋白含量符合獻(xiàn)血標(biāo)準(zhǔn)；3）血滴懸浮在硫酸銅溶液上部，15秒時不下沉，表明血液比重小于硫酸銅溶液比重，血紅蛋白含量不符合獻(xiàn)血標(biāo)準(zhǔn)。
A.4.4 記錄檢測結(jié)果。
A.5 硫酸銅溶液配制方法
A.5.1 貯存液（比重為1.1000）配制 稱取硫酸銅結(jié)晶(CuSO4•5H2O，分析純)170.0g置于大試劑瓶中，在1000ml容量瓶中加入蒸鎦水至刻度，測量此蒸鎦水的溫度，根據(jù)表A-1查出與溫度相應(yīng)的蒸鎦水毫升數(shù)，不足的容量用滴定管補(bǔ)加入容量瓶中。將容量瓶中蒸鎦水全部傾入盛硫酸銅結(jié)晶的大試劑瓶中，再將容量瓶倒置2分鐘，使蒸鎦水全部滴入大試劑瓶中。此時，容量瓶內(nèi)尚附著蒸鎦水約0.8ml，在計算時此容量已加在表內(nèi)數(shù)字中。搖動試劑瓶使硫酸銅完全溶解，即得比重為1.1000的貯存液。如欲知所配制的貯存液比重是否準(zhǔn)確，可用液體比重天平進(jìn)行測定。如配得的貯存液比重并非1.1000，比重每超過0.0001，則在1000ml溶液中加入蒸鎦水1ml。例如，所配成的貯存液的比重1.1050，則在此溶液1000ml中加入蒸鎦水50ml，即可校正其比重為1.1000。反之，如所配溶液的比重小于1.1000，則每少0.0001，應(yīng)在1000ml硫酸銅溶液中加入飽和硫酸銅溶液1ml。在盛貯存液的試劑瓶上貼好標(biāo)簽，做好配制記錄。
表A-1 配制比重1.1000硫酸銅溶液需用蒸鎦水的容量
|
蒸鎦水溫度℃ |
蒸鎦水量（ml） |
蒸鎦水溫度℃ |
蒸鎦水量（ml） |
|
10 |
1003.6 |
26 |
1006.5 |
|
12 |
1003.8 |
28 |
1007.0 |
|
14 |
1004.0 |
30 |
1007.7 |
|
16 |
1004.3 |
32 |
1008.3 |
|
18 |
1004.7 |
34 |
1008.9 |
|
20 |
1005.1 |
36 |
1009.6 |
|
22 |
1005.5 |
38 |
1010.4 |
|
24 |
1006.0 |
40 |
1011.2 |
A.5.2 工作液配制
A.5.2.1 配制100 ml不同比重工作液所需貯存液容量見表A-2。
A.5.2.2 確定工作液配制總量，量取所需量貯存液，加入容器內(nèi)，慢慢加入蒸鎦水至工作液總量，邊加邊搖勻，以消除硫酸銅溶液加水后容量縮減的影響。配制時貯存液和蒸鎦水的溫度應(yīng)相同，但不一定為25℃，10～40℃之間影響不大。
表A-2 硫酸銅應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液配制
|
比重 |
貯存液用量（ml） |
比重 |
貯存液用量（ml） |
比重 |
貯存液用量（ml） |
|
1.0350 |
34.30 |
1.0490 |
48.20 |
1.0630 |
62.30 |
|
1.0360 |
35.30 |
1.0500 |
49.20 |
1.0640 |
63.35 |
|
1.0370 |
36.30 |
1.0510 |
50.20 |
1.0650 |
64.40 |
|
1.0380 |
37.25 |
1.0520 |
51.25 |
1.0660 |
65.40 |
|
1.0390 |
38.20 |
1.0530 |
52.25 |
1.0670 |
66.40 |
|
1.0400 |
39.20 |
1.0540 |
53.30 |
1.0680 |
67.40 |
|
1.0410 |
40.20 |
1.0550 |
54.30 |
1.0690 |
68.40 |
|
1.0420 |
41.20 |
1.0560 |
55.30 |
1.0700 |
69.40 |
|
1.0430 |
42.20 |
1.0570 |
56.30 |
1.0710 |
70.40 |
|
1.0440 |
43.20 |
1.0580 |
57.30 |
1.0720 |
71.45 |
|
1.0450 |
44.20 |
1.0590 |
58.30 |
1.0730 |
72.50 |
|
1.0460 |
45.20 |
1.0600 |
59.30 |
1.0740 |
73.50 |
|
1.0470 |
46.20 |
1.0610 |
60.30 |
1.0750 |
74.50 |
|
1.0480 |
47.20 |
1.0620 |
61.30 |
|
|
A.5.2.3 工作液配制后應(yīng)檢測其是否符合質(zhì)量要求：1）測定比重是否準(zhǔn)確，可用液體比重天平測定，必要時采用相對密度測定法；2）采用已知低于和高于獻(xiàn)血者血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)的全血進(jìn)行檢測，應(yīng)符合預(yù)期要求。
A.5.2.4 將配置完畢的工作液分裝至小試劑瓶，粘貼標(biāo)簽。
A.5.2.5 記錄配制過程。
附錄B
血液檢測方法的確認(rèn)
B.1 總則
本附錄討論了血站血液檢測實(shí)驗(yàn)室采用一項(xiàng)新的檢測方法，或更換現(xiàn)有檢測方法時需要考慮的因素。通常血液檢測方法包括完成檢測必需的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)程序組合。檢測方法必須由實(shí)驗(yàn)室選擇。必須按照生產(chǎn)商的說明書進(jìn)行操作，確保檢測結(jié)果符合實(shí)驗(yàn)室的要求。
血站對獻(xiàn)血者及其捐獻(xiàn)的血液進(jìn)行強(qiáng)制性血液篩查，包括輸血相關(guān)感染病原學(xué)標(biāo)志物檢測、血型血清學(xué)檢測和酶學(xué)檢測。方法學(xué)包括ELISA法、凝集法、速率法等，以及用于獻(xiàn)血者采血前檢查的快速診斷實(shí)驗(yàn)。
由于以上方法學(xué)原理的不同，方法確認(rèn)的原則也不同。依據(jù)當(dāng)今國際公認(rèn)的一些法規(guī)和指南，本附錄提供了血站血液檢測實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用的檢測方法確認(rèn)的原則和步驟，詣在提高血液檢測實(shí)驗(yàn)室對檢測方法確認(rèn)的一致性和效率，確保檢測方法變化的過程得到有效控制。幫助用戶滿足文件和法規(guī)的要求。
B.2 范圍
為血站血液檢測實(shí)驗(yàn)室檢測方法確認(rèn)提供方案。實(shí)驗(yàn)室需選擇國家批準(zhǔn)的符合國家要求的儀器、試劑盒或檢測方法。在新方法投入常規(guī)使用報告檢測結(jié)果之前，需要就檢測方法在實(shí)驗(yàn)室的使用性能進(jìn)行確認(rèn)。不建議實(shí)驗(yàn)室對生產(chǎn)商提供的檢測方法進(jìn)行自行改動，如果確實(shí)需要修改，應(yīng)與生產(chǎn)商合作進(jìn)行新檢測方法性能的評價測試，以確認(rèn)修改后的系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)室的適用性和可靠性。
需確認(rèn)的對象包括：
實(shí)驗(yàn)室首次引入的檢測方法，如實(shí)驗(yàn)室從未使用過的試劑、儀器等。
實(shí)驗(yàn)室首次將某項(xiàng)目引入現(xiàn)用檢測方法，如HBsAg項(xiàng)目由A儀器檢測改為由B儀器檢測。
若多臺儀器（相同品牌和型號）檢測同一個項(xiàng)目，應(yīng)對每一臺儀器的性能進(jìn)行確認(rèn)比較。
B.3 輸血相關(guān)感染標(biāo)志物檢測方法的確認(rèn)
以下內(nèi)容適用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的確認(rèn)�？焖僭\斷試驗(yàn)和確證試驗(yàn)等定性方法的確認(rèn)可參照本章節(jié)內(nèi)容。
B.3.1 確認(rèn)的一般要求
B.3.1.1 實(shí)驗(yàn)操作的培訓(xùn)
開始確認(rèn)新的檢測方法之前，操作人員應(yīng)當(dāng)有充分的時間熟悉新系統(tǒng)，確定關(guān)鍵的操作步驟。生產(chǎn)商應(yīng)提供試劑或儀器的操作說明，實(shí)驗(yàn)原理，規(guī)格，實(shí)驗(yàn)步驟，局限性，質(zhì)量控制和健康安全信息。生產(chǎn)商應(yīng)對操作者進(jìn)行培訓(xùn)，確保操作人員正確操作。
B.3.1.2 試劑的準(zhǔn)備
應(yīng)選擇經(jīng)國家檢定合格的病原學(xué)標(biāo)志物診斷試劑。嚴(yán)格遵從生產(chǎn)商的說明書進(jìn)行操作。對于正在進(jìn)行確認(rèn)的試劑，所有組份應(yīng)來源于同一批試劑，不能由其他試劑所替代或?qū)嶒?yàn)室自己配制。
B.3.1.3 儀器的準(zhǔn)備
應(yīng)選擇國家批準(zhǔn)使用的檢測儀器。實(shí)驗(yàn)開始前，按要求對儀器進(jìn)行維護(hù)校準(zhǔn)。對于開放試劑的儀器設(shè)備，特別注意試劑說明書要求的操作條件與儀器性能是否相適應(yīng)。如果儀器性能與試劑盒說明書的要求有差異，可以征得試劑生產(chǎn)商協(xié)助和同意，對本實(shí)驗(yàn)室儀器的實(shí)驗(yàn)操作參數(shù)進(jìn)行修正，以達(dá)到試劑盒要求的實(shí)驗(yàn)狀態(tài)。
B.3.1.4 質(zhì)量控制
應(yīng)建立有效的質(zhì)量控制程序。除直接采用生產(chǎn)商提供的質(zhì)控品外，還應(yīng)選擇質(zhì)量、來源穩(wěn)定，無基質(zhì)效應(yīng)的質(zhì)控品作為另外的室內(nèi)質(zhì)控物。如可能，多實(shí)驗(yàn)方法比較過程中，應(yīng)采用相同質(zhì)控物。一些定性實(shí)驗(yàn)每天只需要使用陰性和陽性質(zhì)控物，而另一些定性實(shí)驗(yàn)可以產(chǎn)生量化的質(zhì)控結(jié)果。對此可以采用統(tǒng)計過程控制方法（SPC），用量化數(shù)據(jù)監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過程。確認(rèn)實(shí)驗(yàn)采用的標(biāo)本不能等同于質(zhì)控品使用。實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)確保過程處于受控狀態(tài)，否則必須重新實(shí)驗(yàn)。
B.3.1.5 保持記錄
應(yīng)記錄和監(jiān)控操作人員在實(shí)驗(yàn)過程中的健康安全，確保符合法律要求。保留檢測全過程的數(shù)據(jù)和結(jié)果，包括檢測的速度和使用的適宜性等。
B.3.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
生產(chǎn)商提供的陰性陽性對照實(shí)驗(yàn)
B.3.2.1.1 實(shí)驗(yàn)程序：采用生產(chǎn)商提供的陰性、陽性對照，在不低于10天實(shí)驗(yàn)運(yùn)行的前提下，進(jìn)行至少20次檢測。
B.3.2.1.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)：20次檢測結(jié)果不能出現(xiàn)大于1次陰性陽性對照不符合生產(chǎn)商要求。否則實(shí)驗(yàn)室必須終止實(shí)驗(yàn)，咨詢試劑生產(chǎn)商，查找原因，采取糾正措施。
B.3.2.2 方法精密性實(shí)驗(yàn)
B.3.2.2.1 實(shí)驗(yàn)程序：在定性實(shí)驗(yàn)中，如果能夠產(chǎn)生量化實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如ELISA實(shí)驗(yàn)），應(yīng)采用接近臨界值的標(biāo)本，對精密度進(jìn)行估計。建議采用S/CO為2～4的標(biāo)本，不適宜采用低值的陰性標(biāo)本和高值陽性標(biāo)本，因?yàn)榇祟悩?biāo)本距決定水平點(diǎn)即臨界值（cutoff）的分析濃度相距較遠(yuǎn)。
B.3.2.2.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)：批內(nèi)變異系數(shù)在15%以內(nèi)，批間變異系數(shù)在20%以內(nèi)。
B.3.3 靈敏度及特異性實(shí)驗(yàn)
本實(shí)驗(yàn)采用已知真實(shí)血清學(xué)狀態(tài)的標(biāo)本，經(jīng)檢測獲得方法靈敏度和特異性方面的信息。也可以將不同方法的靈敏性和特異性進(jìn)行比較，得到量化的差異結(jié)果，判斷是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。
B.3.3.1 標(biāo)本的選擇
靈敏度和特異性實(shí)驗(yàn)通常對已知真實(shí)血清學(xué)狀態(tài)的標(biāo)本進(jìn)行檢測。確定標(biāo)本真實(shí)血清學(xué)狀態(tài)可以采用金標(biāo)準(zhǔn)方法或臨床診斷方法。參考血清盤或能力驗(yàn)證（PT）的標(biāo)本可用于本實(shí)驗(yàn)。參考血清盤是指經(jīng)過檢測或經(jīng)過與公認(rèn)方法比較，或具有臨床診斷意義的標(biāo)本。這些標(biāo)本已經(jīng)確立了真實(shí)的血清學(xué)狀態(tài)，可追溯至經(jīng)典方法或臨床診斷結(jié)果�？梢詮臋�(quán)威機(jī)構(gòu)、專業(yè)研究機(jī)構(gòu)和文獻(xiàn)中獲得參考血清盤的來源。參考血清盤應(yīng)包含具有不同分析物濃度的臨床標(biāo)本。如可能，血清盤應(yīng)包含對檢測具有干擾的標(biāo)本。如可造成假陰性和假陽性結(jié)果的自身免疫性疾病、螺旋體疾病、白細(xì)胞抗體、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性骨髓瘤患者的標(biāo)本。盡管商品化參考血清盤在方法確認(rèn)過程中，具有很好的時間和資源效率，但其局限性在于可能忽視了實(shí)驗(yàn)室目的檢測人群中疾病的流行率和病原學(xué)因子抗原譜的分布。因此，使用參考血清盤、能力驗(yàn)證標(biāo)本結(jié)合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測標(biāo)本，可以提供更有意義、更可靠的確認(rèn)結(jié)果。
PT材料可能存在基質(zhì)干擾，對方法性能產(chǎn)生錯誤判斷。當(dāng)PT材料為臨界標(biāo)本，或分子結(jié)構(gòu)不同于天然血清，導(dǎo)致抗原決定簇不能被正常識別時，這種干擾尤其明顯。
B.3.3.2 標(biāo)本的數(shù)量
標(biāo)本數(shù)量的估算，統(tǒng)計學(xué)中稱為標(biāo)本含量的估算依據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計的類型、結(jié)果變量的性質(zhì)、研究目的和采用的統(tǒng)計分析方法而不同。對于檢測結(jié)果為計數(shù)資料的實(shí)驗(yàn)（如定性實(shí)驗(yàn)），一般而言，在實(shí)驗(yàn)誤差控制較好的情況下，不同血清學(xué)狀態(tài)的標(biāo)本數(shù)量至少為30份。否則可能影響實(shí)驗(yàn)的統(tǒng)計學(xué)功效。
B.3.3.3 標(biāo)本的保存
應(yīng)確保標(biāo)本可用于常規(guī)檢測并處于穩(wěn)定狀態(tài)，盡可能保持實(shí)驗(yàn)標(biāo)本新鮮。如需凍存，血清或血漿應(yīng)保存在-20℃的條件下。實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的保存狀態(tài)、凍融次數(shù)、使用次數(shù)和時間應(yīng)盡量一致，避免標(biāo)本產(chǎn)生偏差。如需要方法比較實(shí)驗(yàn)，應(yīng)在相同時間進(jìn)行，最大限度減小由于標(biāo)本放置時間不同產(chǎn)生的結(jié)果差異。
B.3.3.4 數(shù)據(jù)的收集和整理
及時記錄和檢查所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，盡早發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)和人為的誤差。如果能夠確定一些結(jié)果是由于可知的差錯造成，應(yīng)詳細(xì)記錄差錯原因，數(shù)據(jù)不能用于后續(xù)分析過程。如果不能夠確定產(chǎn)生異常結(jié)果的原因，在數(shù)據(jù)組中保留原始結(jié)果。
B.3.3.5 數(shù)據(jù)的分析
B.3.3.5.1 單一檢測方法靈敏性和特異性估計
如果明確了每份檢測標(biāo)本真實(shí)的血清學(xué)狀態(tài)，檢測方法的靈敏度和特異性很容易計算。表Ｂ－1為反映一個定性實(shí)驗(yàn)檢測已知真實(shí)血清學(xué)狀態(tài)標(biāo)本的結(jié)果的2×2四格表資料。通過這組數(shù)據(jù)可以計算被估計的靈敏度、特異性。
表B－1 試驗(yàn)方法結(jié)果與診斷結(jié)果的2×2四格表
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診斷結(jié)果 |
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方法結(jié)果 |
陽性 |
陰性 |
總計 |
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陽性 |
A |
B |
A+B |
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陰性 |
C |
D |
C+D |
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總計 |
A+C |
B+D |
N |
B.3.3.5.1.1 靈敏度和特異性
估計靈敏度＝100%〔A/(A+C)〕
估計特異性＝100%〔D/(B+D)〕
靈敏度和特異性95%置信區(qū)間可通過二項(xiàng)分布計算。
B.3.3.5.2 兩方法靈敏度和特異性的比較
可采用完全隨機(jī)設(shè)計和配對設(shè)計實(shí)驗(yàn)，比較兩檢測方法的靈敏度和特異性。完全隨機(jī)設(shè)計時，可采用完全隨機(jī)設(shè)計x2檢驗(yàn)。兩方法采用不同的標(biāo)本，標(biāo)本相對獨(dú)立。這種情況下兩方法靈敏度和特異性的比較實(shí)際是兩樣本率的比較。配對設(shè)計時，可采用配對設(shè)計的McNemar x2檢驗(yàn)。兩方法采用相同的標(biāo)本，得到兩個相關(guān)的靈敏度和特異性，這時注意當(dāng)標(biāo)本數(shù)較少時，需要計算校正x2或采用精確概率法檢驗(yàn)。詳細(xì)計算見B.3.3.5.3。
注意如果需要判斷檢測方法的準(zhǔn)確性，單憑比較靈敏度和特異性是不夠的。除非一個方法的靈敏度和特異性均大于或小于另一方法，否則只能比較相同靈敏度時的特異性，或相同特異性時的靈敏度。當(dāng)靈敏性和特異性均不相同時，很難比較兩方法準(zhǔn)確性。這時可采用受試者工作特征曲線法（ROC曲線法）進(jìn)行比較。該法是近年來公認(rèn)的評價和比較檢測方法準(zhǔn)確度的較好方式。該方法可以考慮檢測方法在所有臨界值時的靈敏度和特異性。通過比較不同方法ROC曲線下的面積，確定和參考方法的特性。鑒于此項(xiàng)內(nèi)容不在本規(guī)程要求的范圍，實(shí)驗(yàn)室人員如需要了解更多信息，可以查找相關(guān)資料。
如果需要量化兩方法靈敏度和特異性之間差異，可以對靈敏度或特異性的差異進(jìn)行估計。以配對設(shè)計實(shí)驗(yàn)為例，兩方法采用相同的標(biāo)本進(jìn)行檢測的結(jié)果可以匯集成表B－2。如果兩方法采用的標(biāo)本不同，則不能采用表2的方式整理數(shù)據(jù)。
表B－2 兩方法結(jié)果和診斷結(jié)果的三項(xiàng)比較
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方法結(jié)果 |
總標(biāo)本數(shù) |
真實(shí)診斷結(jié)果 |
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方法1 |
方法2 |
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陽性 |
陰性 |
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陽性 |
陽性 |
a=a1+a2 |
a1 |
a2 |
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陽性 |
陰性 |
b=b1+b2 |
b1 |
b2 |
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陰性 |
陽性 |
c=c1+c2 |
c1 |
c2 |
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陰性 |
陰性 |
d=d1+d2 |
d1 |
d2 |
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總標(biāo)本數(shù) |
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N |
n1 |
n2 |
B.3.3.5.2.1 兩方法靈敏度差異估計
兩方法靈敏度估計
靈敏度1=100%[(a1+b1)/n1]
靈敏度2=100%[(a1+c1)/n1]
兩方法靈敏度差異估計
靈敏度1－靈敏度2=100%[(b1－b1)/n1]
B.3.3.5.2.2 兩方法特異性差異估計
兩方法特異性估計
特異性1=100%[(c2+d2)/n2]
特異性2=100%[(b2+d2)/n2]
兩方法特異性差異估計
特異性1－特異性2=100%[(c2－b2)/n2]
B.3.3.5.3 不同檢測方法檢測結(jié)果的統(tǒng)計分析
通常采用配對設(shè)計四格表x2檢驗(yàn)和Kappa檢驗(yàn)評價兩個定性檢測方法性能的差異或一致性。
如果已知標(biāo)本的血清學(xué)狀態(tài)，或者已存在特設(shè)或隱含的金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果，可采用配對設(shè)計四格表x2檢驗(yàn)中的McNemar x2檢驗(yàn)評價兩方法結(jié)果的不一致性，Kappa檢驗(yàn)評價兩方法結(jié)果的一致性。
如果未知標(biāo)本的血清學(xué)狀態(tài)，檢測結(jié)果有序變量的檔次劃分也是相同的，也可以采用Kappa檢驗(yàn)評價兩種檢測方法結(jié)果的一致性。另外，兩方法的符合性指標(biāo)也能夠量化兩種檢測方法結(jié)果的一致程度。
B.3.3.5.3.1 配對設(shè)計四格表x2檢驗(yàn)（McNemar x2檢驗(yàn)）：對于隱含金標(biāo)準(zhǔn)或特設(shè)金標(biāo)準(zhǔn)的2×2四格表資料，可采用McNemar x2檢驗(yàn)，判斷兩種檢測方法結(jié)果不一致部分是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。該法適用于標(biāo)本含量適中的資料，因?yàn)楸痉▋H僅考慮兩檢測方法不一致的情況，而未考慮兩方法檢測結(jié)果一致的情況。當(dāng)n很大，兩方法一致率較高，不一致結(jié)果數(shù)量較小，即使McNemar x2檢驗(yàn)具有統(tǒng)計學(xué)意義，但實(shí)際意義往往不大。通常適用于b+c≥40。
注意當(dāng)25≤b＋c＜40，采用McNemar檢驗(yàn)分析配對設(shè)計四格表資料需作連續(xù)性校正。
若b+c＜25，應(yīng)采用精確概率法檢驗(yàn)。
B.3.3.5.3.2 Kappa檢驗(yàn)：Kappa統(tǒng)計量是Cohen1960年提出的一種校正機(jī)遇之后衡量兩種檢測方法一致性的指標(biāo)。Kappa（常縮寫成K）值在－1到＋1之間，如果K＝－1，說明兩種檢測方法檢測的結(jié)果完全不一致；K＝0，說明觀察的一致性完全由偶然誤差造成；K＝1，說明完全排除機(jī)遇一致性后的真正一致性。一般對總體而言，若K＞0.75，表明一致性為優(yōu)；若K在0.4～0.75之間，表明一致性良好；若K＜0.4，表明一致性較差。
B.3.3.5.3.3 兩種檢測方法結(jié)果的符合性估計
如果需要量化兩方法檢測結(jié)果的符合程度，可以對兩方法檢測結(jié)果的符合性進(jìn)行估計。
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方法2 |
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方法1 |
陽性 |
陰性 |
總計 |
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陽性 |
a |
b |
a+b |
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陰性 |
c |
d |
c+d |
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總計 |
a+c |
b+d |
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B.3.3.5.3.4 符合性＝100%[(a+d)/n]
B.4 ALT檢測方法的確認(rèn)
以下內(nèi)容適用于ALT速率法確認(rèn)。其它定量檢測方法確認(rèn)可參照本規(guī)程。
B.4.1 確認(rèn)的一般要求
B.4.1.1 實(shí)驗(yàn)操作的培訓(xùn)
開始確認(rèn)新的檢測方法之前，操作人員應(yīng)當(dāng)有充分的時間熟悉新系統(tǒng)，確定關(guān)鍵的操作步驟。生產(chǎn)商應(yīng)提供試劑或儀器的操作說明，實(shí)驗(yàn)原理，規(guī)格，實(shí)驗(yàn)步驟，局限性，質(zhì)量控制和健康安全信息。生產(chǎn)商應(yīng)對操作者進(jìn)行培訓(xùn)，確保操作人員正確操作被確認(rèn)系統(tǒng)。
B.4.1.2 試劑的準(zhǔn)備
應(yīng)選擇國家批準(zhǔn)生產(chǎn)的ALT診斷試劑。嚴(yán)格遵從生產(chǎn)商的說明書進(jìn)行操作。對于正在進(jìn)行確認(rèn)的試劑，所有組份應(yīng)來源于同一批試劑，不能由其他試劑所替代或?qū)嶒?yàn)室自己配制。
B.4.1.3 儀器的準(zhǔn)備
應(yīng)選擇國家批準(zhǔn)使用的檢測儀器。實(shí)驗(yàn)開始前，按照要求對儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。校準(zhǔn)品必須能夠溯源至國家或國際標(biāo)準(zhǔn)�？梢杂尚�(zhǔn)品的生產(chǎn)商提供相關(guān)的校準(zhǔn)程序和溯源證明。對于開放試劑的儀器設(shè)備，特別注意試劑說明書要求的操作條件與儀器性能是否相適應(yīng)。如果儀器性能與試劑盒說明書的要求有差異，可以征得試劑生產(chǎn)商協(xié)助和同意，對本實(shí)驗(yàn)室儀器的實(shí)驗(yàn)操作參數(shù)進(jìn)行修正，以達(dá)到試劑盒要求的實(shí)驗(yàn)狀態(tài)。
B.4.1.4 質(zhì)量控制
應(yīng)建立有效的質(zhì)量控制程序。選擇質(zhì)量、來源穩(wěn)定，無基質(zhì)效應(yīng)的質(zhì)控品作為室內(nèi)質(zhì)控物。確認(rèn)實(shí)驗(yàn)采用的標(biāo)本不能等同于質(zhì)控品使用。應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)過程處于受控狀態(tài)，否則必須重新實(shí)驗(yàn)。
B.4.1.5 保持實(shí)驗(yàn)記錄
應(yīng)記錄和監(jiān)控操作人員在實(shí)驗(yàn)過程中的健康安全，確保符合法律要求。保留檢測全過程的數(shù)據(jù)和結(jié)果，包括檢測的速度和使用的適宜性等。
B.4.2 正確度的估計
正確度估計最常用的方法：
方法比較實(shí)驗(yàn)：采用新的檢測方法和參加過能力驗(yàn)證的檢測方法或公認(rèn)的參考方法，同時檢測一批不同ALT濃度的標(biāo)本。通過結(jié)果的差異了解新系統(tǒng)引入后的偏倚是否在允許誤差范圍內(nèi)。通常將新系統(tǒng)方法稱為比較方法（y），與之比較的系統(tǒng)方法稱為參考方法（x），該實(shí)驗(yàn)也稱為方法學(xué)比較實(shí)驗(yàn)。
能力驗(yàn)證活動：直接參加權(quán)威機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證活動，能力驗(yàn)證的成績可以證明新的檢測方法檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
以下為方法比較實(shí)驗(yàn)的設(shè)計和數(shù)據(jù)分析過程。
B.4.2.1 標(biāo)本的選擇
B.4.2.1.1 標(biāo)本數(shù)量：實(shí)驗(yàn)標(biāo)本數(shù)至少40份，更多的標(biāo)本量可以使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠。每份標(biāo)本應(yīng)有足以完成雙份測定的量。如果不夠，可以將分析物濃度接近的兩份標(biāo)本混合使用。
B.4.2.1.2 標(biāo)本分析物濃度范圍：如可能，應(yīng)選擇有50％實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的分析物濃度不在參考范圍內(nèi)。
B.4.2.2 實(shí)驗(yàn)程序
時間至少5天。采用兩種方法，將標(biāo)本按照序號遞增和遞減的順序測定2次。如第1次檢測序號為1、2、3、4、5、6、7、8，第2次為8、7、6、5、4、3、2、1。當(dāng)天的方法比較實(shí)驗(yàn)應(yīng)在2小時內(nèi)完成。
B.4.2.3 數(shù)據(jù)分析
B.4.2.3.1 初步判斷：剔除有明顯人為誤差的結(jié)果。內(nèi)部質(zhì)控失控時，必須重新檢測。
B.4.2.3.2 離群點(diǎn)的剔除：設(shè)參考方法測定結(jié)果為x值，第一次測定值為x1，第二次測定值為x2。比較方法測定結(jié)果為y值，第一次測定值為y1，第二次測定值為y2。
B.4.2.3.3 方法內(nèi)重復(fù)測定值離群點(diǎn)的去除
計算△xi=∣xi1-xi2∣； △yi=∣yi1-yi2∣
計算 ；
計算4 ，4
以4 和4 為離群限值，如果沒有超出，繼續(xù)方法間配對結(jié)果離群點(diǎn)檢驗(yàn)；否則繼續(xù)相對差異檢驗(yàn)，進(jìn)行如下最終判斷
計算 ；
計算 ；
最終以4 和4 為判斷離群點(diǎn)限值
B.4.2.3.4 方法間配對結(jié)果離群點(diǎn)的去除
計算Eij＝∣yij-xij∣，i為標(biāo)本序號1～40，j為重復(fù)結(jié)果序號1或2。
計算
以4 為離群限值。如果全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中離群點(diǎn)超過2個，應(yīng)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
B.4.2.3.5 初步判斷線性回歸狀況
x－y散點(diǎn)圖
以參考方法所有結(jié)果為x值，比較方法所有結(jié)果為y值，繪制散點(diǎn)圖。
以參考方法每個標(biāo)本兩次檢測結(jié)果的均值為x值，比較方法每個標(biāo)本兩次檢測結(jié)果的均值為y值，繪制散點(diǎn)圖。比較兩圖有無明顯差異。如無明顯差異，說明方法比較實(shí)驗(yàn)的隨機(jī)誤差對比較結(jié)果影響不大。
x均值（x－y）均值差散點(diǎn)圖
以參考方法每個標(biāo)本兩次檢測的均值為x值，兩方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果均值差（x－y）為y值，繪制散點(diǎn)圖。觀察均值差隨x值增大的變化。如果點(diǎn)的分布表現(xiàn)出一定的趨勢，預(yù)示著兩方法之間系統(tǒng)誤差的存在。
B.4.2.3.6 標(biāo)本分析物濃度分布檢驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的離散度和對應(yīng)分析物濃度分布的寬度都會影響r值的大小。一般如果r≥0.975（r2≥0.95），x取值范圍適宜，否則應(yīng)擴(kuò)大數(shù)據(jù)范圍。
B.4.2.3.7 線性回歸計算
每份標(biāo)本用兩個方法進(jìn)行兩次測定。將參考方法的x1和比較方法的y1對應(yīng)，參考方法的x2和比較方法的y2對應(yīng)，組成成對數(shù)據(jù)。采用所有成對數(shù)據(jù)進(jìn)行直線回歸。得回歸方程 。理想狀態(tài)下 ，即b＝1， ＝0。如果b≠1， ≠0，說明兩方法間存在系統(tǒng)誤差，需要對誤差進(jìn)行評估。如了解Y方法引入后相對于X方法在臨床決定水平濃度Xc處的系統(tǒng)誤差（SE）。
B.4.2.4 可接受標(biāo)準(zhǔn)
r≥0.975或r2≥0.95。醫(yī)學(xué)決定水平處新方法引入的系統(tǒng)誤差小于CLIA’88允許誤差的1/2。
B.4.3 精密度的估計
精密度估計最常用的方法是采用穩(wěn)定的標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測。求得均值（x）、標(biāo)準(zhǔn)差(s)和變異系數(shù)（CV）。精密度的好壞通常采用不精密度表示，不精密度通常以CV體現(xiàn)。應(yīng)在明確標(biāo)本的來源、濃度、實(shí)驗(yàn)周期的前提下，確定檢測方法的不精密度。
B.4.3.1 標(biāo)本的選擇
B.4.3.1.1 標(biāo)本分析物濃度范圍：鑒于血站血液檢測實(shí)驗(yàn)室檢測對象為健康的獻(xiàn)血人群，可采用中、低兩個ALT濃度的標(biāo)本進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)。標(biāo)本的基質(zhì)應(yīng)近似于人源標(biāo)本。
B.4.3.1.2 標(biāo)本的保存：精密度實(shí)驗(yàn)需要在若干天內(nèi)完成，對于冰凍保存的標(biāo)本和凍干復(fù)溶標(biāo)本，應(yīng)嚴(yán)格控制操作手法均一、復(fù)溶時間、加液的準(zhǔn)確性、混勻的力度等，力求實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的穩(wěn)定、均一。
B.4.3.2 實(shí)驗(yàn)程序
B.4.3.2.1 對每個水平的標(biāo)本分別做批內(nèi)和天間的重復(fù)測定。精密度實(shí)驗(yàn)與常規(guī)標(biāo)本檢測同時進(jìn)行，不可替代實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制過程。
B.4.3.2.2 批內(nèi)實(shí)驗(yàn)：將實(shí)驗(yàn)標(biāo)本插入常規(guī)檢測標(biāo)本一同檢測。一批內(nèi)連做20次。對應(yīng)質(zhì)控結(jié)果為受控狀態(tài)。
B.4.3.2.3 批間實(shí)驗(yàn)：每天對實(shí)驗(yàn)標(biāo)本做1次檢測，連做20天。每天對應(yīng)質(zhì)控結(jié)果為受控狀態(tài)。
B.4.3.3 數(shù)據(jù)分析
B.4.3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)差計算
批內(nèi)和天間標(biāo)準(zhǔn)差均可采用以下公式計算
B.4.3.3.2 變異系數(shù)計算
批內(nèi)和天間變異系數(shù)均可采用以下公式計算
×100
B.4.3.4 可接受標(biāo)準(zhǔn)
參照Westgard和Ceroblewski等提出高效檢驗(yàn)對精密度要求的觀點(diǎn)，批內(nèi)不精密度CV應(yīng)小于CLIA允許誤差的1/4，批間不精密度CV應(yīng)小于CLIA允許誤差的1/3。對于ALT實(shí)驗(yàn)，CLIA允許誤差限值T±20%，因此ALT檢測方法的批內(nèi)不精密度CV應(yīng)小于5%，批間不精密度CV應(yīng)小于6.7%。
B.4.4 檢測可報告范圍
檢測可報告范圍確認(rèn)實(shí)驗(yàn)通常采用配制包含不同分析物濃度的系列標(biāo)本進(jìn)行檢測，將按稀釋比例計算的預(yù)期值和實(shí)際測量值設(shè)置為兩個變量進(jìn)行線性回歸�；貧w直線應(yīng)當(dāng)為過原點(diǎn)，斜率為1的直線。直線所達(dá)的限值即為結(jié)果的檢測范圍。
B.4.4.1 標(biāo)本的選擇
準(zhǔn)備一份ALT<30IU的低濃度血清（L）和ALT在500IU左右的高濃度血清（H）。將高低兩份血清按照5L， 4L+1H， 3L+2H， 2L+3H， 1L+4H， 5H的比例配制混合，形成系列血清。
B.4.4.2 實(shí)驗(yàn)程序
檢測系列血清，每份標(biāo)本重復(fù)4次。
B.4.4.3 數(shù)據(jù)分析
B.4.4.3.1 剔除異常點(diǎn)：剔除明顯異常的檢測結(jié)果，并補(bǔ)充數(shù)據(jù)。
B.4.4.3.2 計算預(yù)期值：計算低值和高值標(biāo)本的結(jié)果均值。按照稀釋關(guān)系，計算每個標(biāo)本的分析物理論濃度，即為預(yù)期值。
B.4.4.3.3 預(yù)期值－實(shí)測值的線性回歸：每個標(biāo)本有4個重復(fù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)測值。每個實(shí)測值與其預(yù)期值相對應(yīng)，形成成對數(shù)據(jù)。以x表示預(yù)期值，y表示實(shí)測值，描點(diǎn)繪圖。得到回歸方程 。
B.4.4.3.4 初步判斷：理想狀態(tài)下 中b＝1， ＝0。但實(shí)際工作中很難達(dá)到。因此如果b在1.00±0.03的范圍內(nèi)， 近于0，則可直接判斷該方法可報告范圍在實(shí)驗(yàn)涉及濃度范圍內(nèi)。
B.4.4.3.5 如果b不接近1， 較大，應(yīng)具體分析高濃度還是低濃度的預(yù)期值和實(shí)測值存在較大偏倚�？梢陨崛ツ辰M數(shù)據(jù)，重新進(jìn)行回歸計算。如果縮小范圍后，b和 能夠滿足要求，即說明縮小的濃度范圍即是實(shí)際的檢測范圍。
B.4.4.3.6 可以通過以下統(tǒng)計假設(shè)檢驗(yàn)進(jìn)行判斷。
B.4.4.3.6.1 截距a和0差異的t檢驗(yàn)
假設(shè)H0：a=0；H1： a≠0；
計算
計算
計算 ，
B.4.4.3.6.2 斜率b和1差異的t檢驗(yàn)
假設(shè)H0：b=1；H1： b≠1；
計算
計算
計算 ，
B.4.5 正常值參考范圍確認(rèn)
采用新方法對20份健康獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行檢測。最多允許1個結(jié)果不在試劑盒提供的參考范圍內(nèi)。
B.5 ABO血型和RhD抗原檢測方法的確認(rèn)
以下內(nèi)容適用于獻(xiàn)血者血型血清學(xué)方法確認(rèn)。
B.5.1 確認(rèn)的一般要求
B.5.1.1 實(shí)驗(yàn)操作的培訓(xùn)
開始確認(rèn)新的檢測方法之前，操作人員應(yīng)當(dāng)有充分的時間熟悉新系統(tǒng)，確定關(guān)鍵的操作步驟。生產(chǎn)商應(yīng)提供試劑或儀器的操作說明，實(shí)驗(yàn)原理，規(guī)格，實(shí)驗(yàn)步驟，局限性，質(zhì)量控制和健康安全信息。生產(chǎn)商應(yīng)對操作者進(jìn)行培訓(xùn)，確保操作人員正確操作。
B.5.1.2 試劑的準(zhǔn)備
應(yīng)選擇國家批準(zhǔn)使用的血型試劑，嚴(yán)格遵從生產(chǎn)商的說明書進(jìn)行操作。對于正在進(jìn)行確認(rèn)的試劑，所有組份應(yīng)來源于同一批試劑，不能由其他試劑所替代（即使另一種試劑為同一廠家生產(chǎn)）或?qū)嶒?yàn)室自己配制。實(shí)驗(yàn)室對試劑自行修改，如稀釋試劑，應(yīng)取得生產(chǎn)商的認(rèn)可，因?yàn)槿魏涡薷目梢詫?dǎo)致對試劑的質(zhì)量保證失效，并產(chǎn)生相關(guān)責(zé)任。
B.5.1.3 儀器的準(zhǔn)備
應(yīng)選擇國家批準(zhǔn)使用的檢測儀器。實(shí)驗(yàn)開始前，按照要求對儀器進(jìn)行維護(hù)校準(zhǔn)。對于開放試劑的儀器設(shè)備，特別注意試劑說明書要求的操作條件與儀器性能是否相適應(yīng)。如果儀器性能與試劑盒說明書的要求有差異，可以征得試劑生產(chǎn)商協(xié)助和同意，對本實(shí)驗(yàn)室儀器的實(shí)驗(yàn)操作參數(shù)進(jìn)行修正，以達(dá)到試劑盒要求的實(shí)驗(yàn)狀態(tài)。
B.5.1.4 質(zhì)量控制
應(yīng)建立有效的質(zhì)量控制程序。確保常規(guī)平行實(shí)驗(yàn)中已知抗原和已知抗體的質(zhì)控物反應(yīng)正確，否則必須重新實(shí)驗(yàn)。
B.5.1.5 保持實(shí)驗(yàn)記錄
應(yīng)記錄和監(jiān)控操作人員在實(shí)驗(yàn)過程中的健康安全，確保符合法律要求。保留檢測全過程的數(shù)據(jù)和結(jié)果，包括檢測的速度和使用的適宜性等。
B.5.2 平行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)
所有實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用平行實(shí)驗(yàn)的方式，用常規(guī)標(biāo)本，將新方法與現(xiàn)用方法進(jìn)行比較，確認(rèn)新方法的常規(guī)使用狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)時間最短1周。操作程序和實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)文件化。應(yīng)定期進(jìn)行關(guān)鍵標(biāo)本（弱抗原或弱抗體標(biāo)本）重復(fù)實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)方法的穩(wěn)定性和耐用性。
B.6 確認(rèn)記錄
B.6.1 實(shí)驗(yàn)過程記錄應(yīng)包括：
B.6.1.1 檢測標(biāo)本類型及各類型數(shù)量；
B.6.1.2 檢測日期；
B.6.1.3 操作實(shí)驗(yàn)者的級別和能力；
B.6.1.4 使用試劑的詳細(xì)資料，包括：批號、效期等；
B.6.1.5 采用修正條件的詳細(xì)資料，如溫度、孵育時間，離心力、加速減速率、離心時間；
B.6.1.6 設(shè)備詳細(xì)資料；
B.6.1.7 判讀方法的詳細(xì)資料，包括適當(dāng)?shù)腸utoff值。
B.6.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄應(yīng)包括：
B.6.2.1 所有結(jié)果并繪制表格，包括陽性反應(yīng)和陰性控制結(jié)果；
B.6.2.2 差異結(jié)果、數(shù)量和類型，以表格形式體現(xiàn)。
B.6.3 確認(rèn)結(jié)論記錄應(yīng)包括：
B.6.3.1 用戶界面友好性；
B.6.3.2 操作人員需要的水平，培訓(xùn)要求；
B.6.3.3 新產(chǎn)品/系統(tǒng)的實(shí)用性、耐用性，自動化效能；
B.6.3.4 不同情況下使用的適宜性（批量標(biāo)本處理或單一緊急標(biāo)本處理）；
B.6.3.5 新產(chǎn)品/系統(tǒng)的貯存期，包括貯存末期的性能；
B.6.3.6 方便的儀器維護(hù)；
B.6.3.7 健康安全方面，包括數(shù)據(jù)采集和處理安全性；
B.6.3.8 任何過程中暴露的系統(tǒng)弱點(diǎn)和對系統(tǒng)改進(jìn)的建議，并通知生產(chǎn)商，如果生產(chǎn)商對此實(shí)施了改進(jìn)方案，重新實(shí)驗(yàn)的結(jié)果應(yīng)在報告中體現(xiàn)。
附錄C 血液檢測試劑（酶聯(lián)免疫/核酸試劑）
進(jìn)貨驗(yàn)收與放行記錄表
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1 訂購 試劑品名 規(guī)格 生產(chǎn)方 |
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銷售方 銷售員姓名及身份證號碼 |
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試劑產(chǎn)銷證照是否齊全有效？ 采購合同是否有效？ |
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訂購數(shù)量 訂購價格 訂購者 訂購日期 |
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2 驗(yàn)貨與隔離 驗(yàn)貨結(jié)論 倉管員 驗(yàn)貨日期 |
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2.1 外觀檢查（箱體完整無損，運(yùn)輸冷鏈符合要求，試劑包裝盒完整無損，無液體泄漏） |
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2.2 到貨數(shù)量 銷售憑證內(nèi)容(購貨單位、試劑、供貨商等名稱，規(guī)格、批號、數(shù)量、價格) |
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2.3 批號 出廠質(zhì)量檢驗(yàn)報告 SFDA批簽發(fā)文件 |
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2.4 隔離存放（將試劑存放于 ℃隔離冰箱） |
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3 抽樣與收樣（任意抽樣1件） 抽樣者 日期 收樣者 日期 |
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4 測試 測試結(jié)論 測試者 日期 |
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4.1 試劑說明書版本檢查 |
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4.2 試劑盒組成、組分性狀與說明書一致；無泄漏，足量，標(biāo)識正確 |
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4.3 采用測試樣本，按照試劑說明書進(jìn)行檢測 |
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4.3.1 試劑盒陰性、陽性對照品檢測結(jié)果符合試劑說明書要求 |
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4.3.2 以現(xiàn)用室內(nèi)質(zhì)控品檢測，結(jié)果符合室內(nèi)質(zhì)控程序的要求 |
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4.3.3 其它檢測要求： |
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5 審批 |
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（1）準(zhǔn)予放行使用。 實(shí)驗(yàn)室主管： 日期： 質(zhì)量部門主管： 日期： |
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（2）退貨。 實(shí)驗(yàn)室主管： 日期： 質(zhì)量部門主管： 日期： |
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6 放行 ①“可用”標(biāo)識；② 賬物入合格品庫；③ 向BMIS錄入試劑信息 倉管員 日期： |
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7 附件：① 銷售員身份證復(fù)印件；② 出廠質(zhì)量檢驗(yàn)報告；③ SFDA批簽發(fā)文件；④ 試劑說明書；⑤ 測試記錄 |
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8 附注 ：國家食品藥品監(jiān)督管理局簡稱SFDA |
附錄D
血液檢測室內(nèi)質(zhì)控方法
D.1 總則
血站血液檢測主要包括用于血清學(xué)抗體或抗原檢測的ELISA試驗(yàn)，用于HBV/HCV/HIV DNA或RNA檢測的NAT試驗(yàn)，以及ALT酶學(xué)試驗(yàn)。ELISA試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控通常采用試劑盒陰陽性對照、弱陽性質(zhì)控品實(shí)時監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的有效性，同時采用弱陽性質(zhì)控品和Levey-Jennings質(zhì)控圖監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。ALT作為定量試驗(yàn)通常采用Levey-Jennings質(zhì)控圖監(jiān)控ALT實(shí)驗(yàn)的精密性和有效性。NAT試驗(yàn)以及其它定性試驗(yàn)可借鑒ELISA 的質(zhì)控方法。
D.2 ELISA實(shí)驗(yàn)過程穩(wěn)定性控制
推薦采用Levey-Jennings質(zhì)控圖監(jiān)控ELISA實(shí)驗(yàn)過程的穩(wěn)定性，發(fā)現(xiàn)隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差。實(shí)驗(yàn)室如需采用更多種類的控制圖進(jìn)行質(zhì)控，可查閱相關(guān)文獻(xiàn)。
D.2.1 質(zhì)控規(guī)則
D.2.1.1 質(zhì)控規(guī)則的表示方法
用 方式表示質(zhì)控規(guī)則，“A”代表質(zhì)控測定值個數(shù)，“L”是從正態(tài)統(tǒng)計量得到的質(zhì)控界限。例如， 質(zhì)控規(guī)則指一個質(zhì)控結(jié)果超出了均值加減3倍標(biāo)準(zhǔn)差界限。
D.2.1.2 質(zhì)控規(guī)則的選用
實(shí)驗(yàn)室可選擇Levey-Jennings質(zhì)控圖常規(guī)使用的13s規(guī)則作為在控與失控的判斷規(guī)則，如發(fā)現(xiàn)違背13s規(guī)則的情況，說明實(shí)驗(yàn)過程沒有處于受控狀態(tài)，應(yīng)查找原因予以解決。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況，同時選擇一個監(jiān)控實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)誤差的規(guī)則，如7x規(guī)則，以發(fā)現(xiàn)由于儀器、試劑、環(huán)境條件等因素引起的系統(tǒng)誤差。上述常用質(zhì)控規(guī)則的釋義如下：
13s：一個質(zhì)控值超過 。用于提示可能存在隨機(jī)誤差。
7x：7個連續(xù)的質(zhì)控值落在均值一側(cè)，用于提示可能存在系統(tǒng)誤差。
D.2.2 質(zhì)控圖的建立
D.2.2.1 設(shè)定質(zhì)控圖均值和標(biāo)準(zhǔn)差
在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測條件下，連續(xù)測定同一批號的弱陽性質(zhì)控品10～20天，收集至少20個質(zhì)控數(shù)據(jù)，對數(shù)據(jù)進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，剔除超過±3s以外的數(shù)據(jù)，計算均值及標(biāo)準(zhǔn)差，以此控制后續(xù)實(shí)驗(yàn)過程，直至試劑或質(zhì)控品批號更換。實(shí)驗(yàn)室如采用積累質(zhì)控數(shù)據(jù)計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，具體方法可參見本章節(jié)ALT質(zhì)控均值的計算。但需注意，由于ELISA試劑存在較大的批間差異，積累質(zhì)控數(shù)據(jù)計算的方式可能增大室內(nèi)質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)差和變異度，因此如兩批試劑的質(zhì)控均值和標(biāo)準(zhǔn)差有顯著差異，建議針對新批號試劑重新計算質(zhì)控均值和標(biāo)準(zhǔn)差。
實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建質(zhì)控圖的過程中，如果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)變異度過大，應(yīng)采取措施，穩(wěn)定各個環(huán)節(jié)實(shí)驗(yàn)條件，將變異度控制在可接受范圍內(nèi)。通常情況下，ELISA實(shí)驗(yàn)的變異系數(shù)宜控制在20%以內(nèi)。
D.2.2.2 設(shè)定質(zhì)控圖控制限
控制限通常是以標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)來表示。Levey-Jennings質(zhì)控圖將 設(shè)置為控制限，即控制上限值為 ，控制下限值為 。如果質(zhì)控圖的控制下限值小于1，說明實(shí)驗(yàn)室采用的控制低限（LCL）已經(jīng)低于實(shí)驗(yàn)性能低限（LSL），實(shí)驗(yàn)過程變異較大，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)查找原因，改進(jìn)過程，降低實(shí)驗(yàn)變異度（CV）。
D.2.2.3 繪制質(zhì)控圖
以Y軸為質(zhì)控品的測定值（S/CO值），X軸為質(zhì)控個數(shù)或單位時間。Y軸刻度上各水平線分別為均值、 、 、 上下限，描點(diǎn)繪圖。
當(dāng)采用13s規(guī)則可采用單點(diǎn)質(zhì)控圖，將質(zhì)控數(shù)據(jù)逐一點(diǎn)于質(zhì)控圖上進(jìn)行觀察，以發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)隨機(jī)誤差。
當(dāng)采用7x規(guī)則，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室情況，采用單點(diǎn)質(zhì)控圖或?qū)⒁粋�單位時間內(nèi)（通常為一天）所有質(zhì)控數(shù)據(jù)的均值點(diǎn)于質(zhì)控圖上進(jìn)行觀察，以發(fā)現(xiàn)檢測系統(tǒng)的變化和趨勢。
D.2.2.4 質(zhì)控圖框架的重建
如果更換新批號試劑，鑒于ELISA 實(shí)驗(yàn)的特性和試劑批間的不穩(wěn)定性，可能兩批試劑質(zhì)控均值和標(biāo)準(zhǔn)差存在顯著差異，如需要應(yīng)重新建立質(zhì)控圖框架。
如果更換新批號質(zhì)控品，在試劑批號不變的情況下，可采用將新批號質(zhì)控品和舊批號質(zhì)控品同時檢測的方式，以確保在舊批號質(zhì)控品使用結(jié)束前，獲得計算新批號質(zhì)控品均值和標(biāo)準(zhǔn)差的數(shù)據(jù)，建立質(zhì)控圖框架。
如果質(zhì)控圖使用過程中，出現(xiàn)均值的偏移和標(biāo)準(zhǔn)差變化，需分析并消除產(chǎn)生偏差的原因，必要時應(yīng)重新調(diào)整質(zhì)控圖框架。
D.2.3 失控情況的分析處理
如出現(xiàn)違背實(shí)驗(yàn)有效性判定規(guī)則，應(yīng)視為實(shí)驗(yàn)無效。查找原因，采取糾正措施后重新實(shí)驗(yàn)。
如違背實(shí)驗(yàn)室選擇的質(zhì)控規(guī)則，出現(xiàn)隨機(jī)誤差或系統(tǒng)誤差，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)分析產(chǎn)生誤差原因。引起誤差的因素通常包括操作上的失誤，試劑、校準(zhǔn)物、質(zhì)控品的失效；試劑、質(zhì)控品更換批號或保存末期發(fā)生變化；儀器使用維護(hù)不當(dāng)；質(zhì)控圖建立過程中采用的數(shù)據(jù)不足造成均值和標(biāo)準(zhǔn)差不適宜等。應(yīng)采取糾正措施，消除產(chǎn)生誤差的因素。如果所選擇弱陽性質(zhì)控品超過規(guī)定的S/CO值上限，應(yīng)關(guān)注違背－3s規(guī)則時的實(shí)驗(yàn)狀況，必要時對陰性結(jié)果重新檢測。應(yīng)保存失控情況分析處理記錄。
D.3 ALT實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控
D.3.1 質(zhì)控規(guī)則的選用
D.3.2 質(zhì)控圖的建立
D.3.2.1 設(shè)定質(zhì)控圖均值：在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測條件下，測定同一批號的質(zhì)控品10～20天，收集至少20個質(zhì)控數(shù)據(jù)，對數(shù)據(jù)進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，剔除超過±3s以外的數(shù)據(jù)，計算臨時均值及標(biāo)準(zhǔn)差，以此控制此后一個月的室內(nèi)質(zhì)控情況。一個月結(jié)束后，匯集當(dāng)月所有質(zhì)控數(shù)據(jù)，計算所有在控數(shù)據(jù)積累的質(zhì)控均值和標(biāo)準(zhǔn)差，以此控制下一個月的室內(nèi)質(zhì)控情況。重復(fù)以上操作三到五個月，最終匯集前20個數(shù)據(jù)和三到五個月的質(zhì)控數(shù)據(jù)，計算積累的質(zhì)控均值和標(biāo)準(zhǔn)差，以此作為常規(guī)均值和標(biāo)準(zhǔn)差，控制以后的實(shí)驗(yàn)過程，直至質(zhì)控品批號更換。
D.3.2.2 設(shè)定質(zhì)控圖控制限：控制限通常以標(biāo)準(zhǔn)差的倍數(shù)表示。Levey-Jennings質(zhì)控圖將 設(shè)置為控制限，即控制上限值為 ，控制下限值為 。ALT室內(nèi)質(zhì)控的控制限隨質(zhì)控圖均值和標(biāo)準(zhǔn)差的變化而變化。
D.3.2.3 繪制質(zhì)控圖
D.3.2.4 質(zhì)控圖的重建：鑒于ALT實(shí)驗(yàn)的特性，質(zhì)控圖可包含多個試劑批號的變化。如果更換新批號質(zhì)控品，可采用將新批號質(zhì)控品和舊批號質(zhì)控品同時檢測的方式，以確保在舊批號質(zhì)控品使用結(jié)束前，獲得計算新批號質(zhì)控品均值和標(biāo)準(zhǔn)差的數(shù)據(jù)，建立質(zhì)控圖。
D.3.2.5 如果質(zhì)控圖使用過程中，出現(xiàn)均值的偏移和標(biāo)準(zhǔn)差變化，需分析并消除產(chǎn)生偏差的原因，必要時應(yīng)重新構(gòu)建質(zhì)控圖。
D.3.3 失控情況的分析處理：如出現(xiàn)違背質(zhì)控規(guī)則的情況，需分析產(chǎn)生誤差的類型及原因，并視為實(shí)驗(yàn)失控和無效。應(yīng)查找原因，采取糾正措施后重新實(shí)驗(yàn)。引起誤差的因素通常包括操作上的失誤、試劑、校準(zhǔn)物、質(zhì)控品的失效；試劑、質(zhì)控品更換批號或保存末期發(fā)生變化；儀器使用維護(hù)不當(dāng)；由于質(zhì)控圖建立過程中采用的數(shù)據(jù)不足造成均值和標(biāo)準(zhǔn)差不適宜等。應(yīng)保存失控情況分析處理記錄。
D.4 特殊情況下的室內(nèi)質(zhì)控
對于不能每天進(jìn)行血液檢測、質(zhì)控數(shù)據(jù)量少的實(shí)驗(yàn)室，必須保證每次實(shí)驗(yàn)滿足試劑盒質(zhì)控要求，弱陽性質(zhì)控品S/CO≥1。在次基礎(chǔ)上，可適時采用Grubbs氏法進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控。
該方法只需連續(xù)測定3次，即可對第3次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)和控制。具體計算方法如下。
1）計算出測定結(jié)果（至少3次）的平均值（ ）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）。
2）計算SI上限值和SI下限值：
SI上限 = （X最大值- ）/s
SI下限 = ( -X最小值)/s
3）查表1，將SI上限和SI下限與SI值表中的數(shù)值進(jìn)行比較。
表1 SI值表
|
n |
n3s |
n2s |
n |
n3s |
n2s |
|
3 |
1.15 |
1.15 |
12 |
2.55 |
2.29 |
|
4 |
1.49 |
1.46 |
13 |
2.61 |
2.33 |
|
5 |
1.75 |
1.67 |
14 |
2.66 |
2.37 |
|
6 |
1.94 |
1.82 |
15 |
2.70 |
2.41 |
|
7 |
2.10 |
1.94 |
16 |
2.75 |
2.44 |
|
8 |
2.22 |
2.03 |
17 |
2.79 |
2.47 |
|
9 |
2.32 |
2.11 |
18 |
2.82 |
2.50 |
|
10 |
2.41 |
2.18 |
19 |
2.85 |
2.53 |
|
11 |
2.48 |
2.23 |
20 |
2.88 |
2.56 |
當(dāng)SI上限和SI下限值＜n2s時，表示處于控制范圍之內(nèi)，可以繼續(xù)進(jìn)行測定，并重復(fù)以上計算；當(dāng)SI上限和SI限有一值處于n2s和n3s值之間時，說明該值在2s–3s范圍，處于“警告”狀態(tài)；當(dāng)SI上限 和 SI下限有一值＞n3s時，說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。數(shù)字處于 “失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，重新測定質(zhì)控品和標(biāo)本。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它次測定值仍可繼續(xù)使用。當(dāng)檢測的數(shù)字超過20次以后，可轉(zhuǎn)入使用常規(guī)的質(zhì)控方法進(jìn)行質(zhì)控。
D.5 室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的管理
D.5.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期對所有檢測項(xiàng)目的室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，對質(zhì)控圖進(jìn)行評價和維護(hù)，以確保室內(nèi)質(zhì)控的有效運(yùn)行。
D.5.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期對所有檢測項(xiàng)目的室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)、質(zhì)控圖以及失控報告單整理后進(jìn)行存檔。
D.5.3 實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人（或由負(fù)責(zé)人指定的授權(quán)人）應(yīng)定期對室內(nèi)質(zhì)量控制的記錄進(jìn)行審核并簽字。
附錄E
微板法ABO血型定型試驗(yàn)
E.1 本附錄描述了基于手工操作或半自動操作的U型微板技術(shù)的基本步驟。
E.2 正定型（細(xì)胞定型）
E.2.1 在微板的3個干凈孔內(nèi)分別加入1滴抗-A、抗-B，（如需要，可在第三孔內(nèi)加1滴抗-AB進(jìn)行平行試驗(yàn)）。
E.2.2 在含有血型定型試劑的各孔內(nèi)加入1滴1.6%～1.8%紅細(xì)胞懸液；輕叩板邊，混勻孔內(nèi)物質(zhì)�？梢圆捎米詣踊臉颖咎幚硐到y(tǒng)完成抗血清和受檢紅細(xì)胞懸液的配制和加樣。
E.2.3 離心和重懸。離心結(jié)束后用手輕叩微板或借助微板振蕩器重懸細(xì)胞扣。
E.2.4 肉眼觀察紅細(xì)胞是否凝集，判讀結(jié)果并記錄，并與反定型結(jié)果比較。也可以采用具有血型判讀功能的酶標(biāo)儀進(jìn)行結(jié)果的自動判讀。
E.3 反定型（血清定型）
E.3.1 在微板的兩個干凈孔內(nèi)，每孔內(nèi)加1滴受檢者血清或血漿；
E.3.2 在含有血清或血漿的各孔內(nèi)分別加1滴1.6%～1.8%A1、B細(xì)胞（如需要，可添加A2或O細(xì)胞進(jìn)行附加試驗(yàn)）；輕叩板邊，混勻孔內(nèi)物質(zhì)�？梢圆捎米詣踊臉颖咎幚硐到y(tǒng)完成受檢血清/血漿和試劑紅細(xì)胞懸液的配制和加樣。
E.3.3 離心和懸浮。采用既定的離心條件對微板進(jìn)行離心。結(jié)束后用手輕叩微板或借助微板振蕩器重懸細(xì)胞扣
E.3.4 肉眼觀察紅細(xì)胞是否凝集，判讀結(jié)果并記錄，并與正定型結(jié)果比較。也可以采用具有血型判讀功能的酶標(biāo)儀進(jìn)行結(jié)果的自動判讀。
E.4 結(jié)果判讀與解釋
E.4.1 紅細(xì)胞溶血或在微板底部形成凝集細(xì)胞扣都表示陽性結(jié)果；
E.4.2 重懸細(xì)胞扣后，無紅細(xì)胞凝集或溶血表示陰性結(jié)果；
E.4.3 若正反定型結(jié)果不符，應(yīng)分析不一致的原因，并進(jìn)一步試驗(yàn)以確定血型。
E.5 注意事項(xiàng)
E.5.1 如果使用稀釋的抗血清工作液，應(yīng)關(guān)注抗血清試劑的強(qiáng)度和粘度；蛋白濃度過高或過低都會影響檢測結(jié)果。稀釋后工作液的保存不應(yīng)超過1周。
E.5.2 抗血清工作液的配制和紅細(xì)胞懸液的配制應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化。
E.5.3 微板使用前可以用0.1%的牛白蛋白或人血清進(jìn)行預(yù)處理以減少塑料的非特異性吸附。加熱洗滌或用濕巾擦拭U型孔底可減少靜電作用。使用后的微板必須徹底清洗方可重復(fù)使用。
E.5.4 離心條件和離心后對微板的懸浮條件應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化。通常軟質(zhì)U型板離心條件700g×5s；硬質(zhì)U型板離心條件400g×30s；硬質(zhì)V型板離心條件700g×10s。懸浮條件應(yīng)關(guān)注懸浮的頻率、幅度和時間。
E.5.5 如果血型試劑未注明可用于微板試驗(yàn)，或檢測設(shè)備為非系統(tǒng)型，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對微板法血型定型的各個試驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證。以確保血型檢測的準(zhǔn)確性。
附錄F
血液質(zhì)量控制檢查方法
F.1 外觀
F.1.1 檢查方法：于光線明亮處目視檢查
F.2 標(biāo)簽
F.2.1 檢查方法：于光線明亮處目視檢查
F.3 容量
F.3.1 檢查方法
F.3.1.1 稱量血袋重量
F.3.1.2 計算公式
注：如果適用，還應(yīng)減去抗凝劑容量。
F.4 無菌試驗(yàn)
F.4.1 檢測方法
無菌試驗(yàn)方法遵從中華人民共和國藥典（2010年版）三部“無菌檢查法”要求。使用細(xì)菌培養(yǎng)儀進(jìn)行無菌試驗(yàn)應(yīng)參照廠家使用說明書。
F.4.2 注意事項(xiàng)
留取血液樣本前，應(yīng)當(dāng)將血袋中的血液充分混勻，混勻時動作應(yīng)輕柔，不能產(chǎn)生泡沫，也不能使其溶血。
F.5 Hb測定
檢測方法見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“血紅蛋白測定”。使用血細(xì)胞計數(shù)儀測定的應(yīng)參照廠家使用說明。
F.6 游離Hb測定
檢測方法參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“血漿游離紅蛋白測定”。
F.7 血細(xì)胞比容
檢測方法見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“紅細(xì)胞比容”。使用血細(xì)胞計數(shù)儀測定的應(yīng)參照廠家使用說明。
F.8 儲存期末溶血率
F.8.1 檢測方法
在血液儲存期的最后一周內(nèi)取樣，按 F.5、F.6和F.7測定總血紅蛋白、上清游離血紅蛋白、血細(xì)胞比容。
F.8.2 計算公式
F.9 白細(xì)胞殘留量
F.9.1 檢測方法
用留取的去白細(xì)胞血液標(biāo)本進(jìn)行殘余白細(xì)胞檢測。
材料：大容量 Nageotte血細(xì)胞計數(shù)盤、顯微鏡、結(jié)晶紫染色液。
結(jié)晶紫染色液配制
儲存液配制：250mg結(jié)晶紫溶于250mL的50%醋酸溶液中。室溫放置可保存6個月。
使用液配制：1份儲存液加9份3%的醋酸溶液，最終濃度為：結(jié)晶紫0.01mg%（W/V），醋酸7.7%（V/V）。然后使用0.22μ過濾器過濾。
計數(shù)方法：50μl血液標(biāo)本加入450μl使用液中，充分混勻。在Nageotte計數(shù)池中加入上述混合液，將計數(shù)池置于帶蓋潮濕容器中，于室溫放置10～15分鐘。在200倍顯微鏡下對計數(shù)池中兩個計數(shù)區(qū)（每區(qū)有20個長方形格）的白細(xì)胞計數(shù)，40行相當(dāng)于50μl。
計算：
Nageotte計數(shù)盤
公式中：10為稀釋倍數(shù)，50μl為計數(shù)池2個區(qū)的容積
每袋中殘余白細(xì)胞數(shù)按下列公式計算：
殘余白細(xì)胞數(shù)/袋=白細(xì)胞數(shù)/mL×去白細(xì)胞血液容量（mL）/袋
或使用其它經(jīng)驗(yàn)證可使用的方法。
F.10 紅細(xì)胞計數(shù)
檢測方法見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“紅細(xì)胞計數(shù)”。使用血細(xì)胞計數(shù)儀測定的應(yīng)參照廠家使用說明。
F.11 血小板計數(shù)
檢測方法見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“血小板計數(shù)”。使用血細(xì)胞計數(shù)儀測定的應(yīng)參照廠家使用說明。
F.12 血漿蛋白測定
檢測方法見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“血清總蛋白的測定”。
F.13 上清液蛋白含量
檢測方法參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“腦脊液總蛋白測定”。
F.14 pH測定
F.14.1 測定方法
測定方法見《中華人民共和國藥典》（2010年版）三部附錄“pH值測定法”。
F.14.2 注意事項(xiàng)
使用國家計量部門檢定合格的pH 儀。樣品從血袋中移出后應(yīng)立即進(jìn)行檢測，以防標(biāo)本在空氣中暴露時間過長而CO2逸出，導(dǎo)致pH測定值比實(shí)際值偏高。
F.15 Ⅷ因子活性測定
測定方法見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“凝血因子Ⅷ的活性測定（一期法）”。使用血凝儀測定時參照廠家使用說明書。
F.16 纖維蛋白原測定
測定方法見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“血漿纖維蛋白原含量測定”。使用血凝儀測定應(yīng)參照廠家使用說明書。根據(jù)冷沉淀的容量計算出每袋纖維蛋白原含量。
F.17 甘油殘留量
F.17.1 過碘酸鈉法
原理：根據(jù)過碘酸鈉能氧化有機(jī)化合物中的羥基、胺基，使甘油氧化成酸和醛，以溴甲酚紫作指示劑；并用氫氧化鈉進(jìn)行滴定。從消耗氫氧化鈉的毫升數(shù)，即可算出樣品中所含甘油的量。
試劑：16.5%鎢酸鈉溶液：稱取16.5克鎢酸鈉，用蒸餾水溶解，再加蒸餾水稀釋至100mL。
0.5mol/L H2SO4：吸30mL濃硫酸緩緩注入水中，冷卻至室溫，加水稀釋至1000mL。
0.1mol/L NaOH：配制方法見《中華人民共和國藥典》（2010年版）二部 附錄 “滴定液”
0.1%溴甲酚紫溶液：0.1g溴甲酚紫溶入20mL0.02mol/L NaOH溶液中，再加入蒸餾水稀釋至100mL。
14%過碘酸鈉：14g過碘酸鈉先加入少量蒸餾水中溶解，加入2mL濃硫酸使其完全溶解，用蒸餾水稀釋至100mL。
操作方法：按下表操作步驟制備血濾液
血濾液制備
|
試劑 |
mL |
備注 |
|
測定樣品 |
15.0 |
|
|
蒸餾水 |
75.0 |
|
|
16.5% Na2WO4 |
6.0 |
|
|
0.5mol/L H2SO4 |
7.5 |
|
|
用力振搖，進(jìn)行過濾 |
|
|
注：實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)在三角燒瓶中進(jìn)行
分析測定的步驟如下表：
|
試劑 |
空白（mL） |
樣品（mL） |
備注 |
|
過濾后的上清液 蒸餾水 0.1%溴甲酚紫溶液 0.1mol/L NaOH溶液 14%過碘酸鈉 38℃恒溫 0.1%溴甲酚紫溶液 0.1mol/L NaOH溶液 |
100.0
10.0 |
15 100.0
10.0 |
2滴 滴定至藍(lán)色
15分鐘 2滴 滴定至藍(lán)色 |
計算：
0.1mol/L NaOH溶液相當(dāng)于0.00921g甘油
F.17.2 滲透壓測定法
正常血清的滲克分子濃度為289mmol（289mOsm），甘油含量為1%（10g/L）時，其滲克分子濃度為420mmol（420mOsm），因此滲透壓測定法可作為一種檢測去甘油紅細(xì)胞甘油殘存量的參考方法，操作方法應(yīng)參照滲透壓儀器生產(chǎn)廠家使用說明書。
F.17.3 折射儀測定法
使用折射儀是測定滲克分子濃度的一種篩選方法。折射儀讀數(shù)到28（如折射儀型號為10401，折射指數(shù)或比重<1.3384T.S.）與甘油水平不高于1%（90g/L）相關(guān)。折射儀測定法可作為一種檢測甘油含量的參考方法。方法見生產(chǎn)廠家使用說明書。
F.17.4 由于不同方法的準(zhǔn)確性和精密度存在差異，可根據(jù)要求選擇以上相應(yīng)方法或其它方法（如：GPO-PAP二步法）。若采用商品化試劑盒，操作應(yīng)按試劑盒說明書進(jìn)行。
F.18 中性粒細(xì)胞計數(shù)
檢測方法見《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）“白細(xì)胞計數(shù)”。使用血細(xì)胞計數(shù)儀測定的應(yīng)參照廠家使用說明。
F.19 亞甲藍(lán)殘留量
F.19.1 測試樣品準(zhǔn)備
取3 mL Waters Oasis小柱，置于真空萃取裝置上，用6mL甲醇活化，加入6mL供試血漿，萃取亞甲藍(lán)；用30％甲醇6mL清洗，隨后用含1％乙酸的甲醇溶液2mL洗脫，洗脫液離心（3500rpm/10min），取上清液作為樣品溶液。
F.19.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
取亞甲藍(lán)粉末約38mg，精密稱定，置100mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度。精密量取50μl置50mL容量瓶中，用血漿稀釋至刻度，配成最終濃度為約1.0μmol/L的亞甲藍(lán)對照血漿。檢測過濾前后樣品溶液時，必須用同樣的方法萃取檢測標(biāo)準(zhǔn)品。
F.19.3 測定
用含1％乙酸的甲醇溶液作試劑空白，在654nm±2nm波長處測定吸光度。按以下公式計算亞甲藍(lán)在血漿中的殘留量：
血漿中亞甲藍(lán)濃度（μmol/L） ＝
F.19.4 注意事項(xiàng)
病毒滅活冰凍血漿在留取標(biāo)本前應(yīng)置30～37℃融化，融化時間應(yīng)小于6分鐘。為使其盡快融化，應(yīng)不斷輕柔搖動血漿袋。不得急劇搖動血漿袋，以防止血漿中出現(xiàn)大量泡沫。
附錄G
血袋標(biāo)簽確認(rèn)方法
G.1 范圍
本法適用于對擬采用的新的供應(yīng)方所生產(chǎn)的標(biāo)簽的確認(rèn)活動。
G.2 標(biāo)簽紙質(zhì)和粘貼牢固度
G.2.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1）標(biāo)簽的底色應(yīng)為白色，上面的字體建議采用實(shí)體黑色字體。
2）全血標(biāo)簽經(jīng)離心后，血漿標(biāo)簽經(jīng)離心、冷凍、水浴后，標(biāo)簽不能分離。
3）標(biāo)簽外觀沒有破損，相對平整。如出現(xiàn)皺褶，不能影響條碼的掃描和讀碼。
4）粘貼在導(dǎo)管上的條碼，經(jīng)離心、冷凍后在常溫條件下自然融化2小時，條碼與導(dǎo)管之間不能出現(xiàn)分離。
5）對直接粘貼在冰凍血漿（制品表面不平整）袋上的標(biāo)簽，粘貼時制品不需擦拭，可直接粘貼，不能出現(xiàn)標(biāo)簽打滑的現(xiàn)象。
對冷藏后血液制品上的標(biāo)簽，應(yīng)進(jìn)行血袋與血袋之間、手指與標(biāo)簽之間進(jìn)行摩擦，摩擦后標(biāo)簽上的油墨不得脫落。
G.2.2 測試方法－離心試驗(yàn)方法
按采供血過程血袋標(biāo)簽粘貼的操作程序，將抽檢標(biāo)簽粘貼于規(guī)定的部位（血袋上、標(biāo)簽上或留樣皮管）上，在分離紅細(xì)胞和血漿的離心條件下離心30分鐘。離心時將粘貼有標(biāo)簽的血袋按離心杯的容量整齊地擺放于離心杯中。
G.2.3 測試方法（冷凍試驗(yàn)方法）
將血液和制品需冷凍的抽檢標(biāo)簽粘貼于規(guī)定的部位（血袋上、標(biāo)簽上或留樣導(dǎo)管）上，放置－18℃低溫冰箱冷凍24小時。
G.2.4 測試方法－水浴試驗(yàn)方法
對需經(jīng)水浴的血液制品標(biāo)簽應(yīng)進(jìn)行水浴試驗(yàn)。取出粘貼有標(biāo)簽的冷凍血袋，放入于37℃溫水池中水浴60分鐘（低溫沉淀物制品在2～6℃水浴4小時，再放入37℃溫水池中水浴60分鐘）后取出。
G.2.5 測試方法－粘貼牢固度試驗(yàn)方法
對直接粘貼在冰凍血漿袋上的標(biāo)簽，應(yīng)將標(biāo)簽直接粘貼在冰凍好的血袋上。
G.2.6 測試方法－冷藏的試驗(yàn)方法
對需冷藏的血液制品標(biāo)簽放入2-6℃的冷藏冰箱，24小時后取出。
G.2.7 注意事項(xiàng)
標(biāo)簽粘貼牢固度試驗(yàn)在操作時應(yīng)將標(biāo)簽平整地粘貼在血袋上。采供血過程中未規(guī)定的標(biāo)簽粘貼過程不應(yīng)作為標(biāo)簽粘貼牢固度試驗(yàn)的過程。
G.3 條碼掃描和讀碼
G.3.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
各類條碼在常溫、冷藏、冷凍、水浴后均能為條形碼識讀器所讀碼。
G.3.2 測定方法
各類條碼在常溫、冷藏、冷凍、水浴后用條形碼識讀器讀取。
G.4 印章和書寫字跡清晰度
G.4.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
標(biāo)簽在加蓋印章和油性筆書寫后，印章油印及書寫字跡待干后不發(fā)生嚴(yán)重模糊，或部分發(fā)生模糊但仍能夠清楚地辯讀。
G.4.2 測定方法
將標(biāo)簽加蓋印章和使用指定的油性筆書寫，觀察其清晰程度。
G.5 標(biāo)簽安全性能檢測報告：標(biāo)簽廠家應(yīng)提供標(biāo)簽材質(zhì)安全性能檢測報告，以證明其不影響血液質(zhì)量。
附錄H
（資料性附錄）
血站使用的強(qiáng)制檢定工作計量器目錄
H.1 本目錄內(nèi)項(xiàng)目，凡用于貿(mào)易結(jié)算、安全防護(hù)、醫(yī)療衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測的，均實(shí)行強(qiáng)制檢定。
H.2 本目錄所列的計量器具是根據(jù)血站實(shí)際工作情況，從《中華人民共和國強(qiáng)制檢定的工作計量器具目錄》節(jié)錄而成，并對序號進(jìn)行了重新編排。包括：
1）玻璃液體溫度計：玻璃液體溫度計；
2）體溫計：體溫計；
3）磚碼：砝碼；
4）天平：天平；
5）秤：電子秤；
6）酒精計：酒精計；
7）密度計：密度計；
8）血壓計：血壓計、血壓表；
9）照射量計（含醫(yī)用輻射源）：照射量計、醫(yī)用輻射源；
10）電離輻射防護(hù)儀：射線監(jiān)測儀、照射量率儀、放射性表面污染儀、個人劑量計；
11）聲級計：聲級計；
12）酸度計：酸度計、血?dú)馑釅A平衡分析儀；
13）火焰光度計：火焰光度計；
14）分光光度計：可見光分光光度計、紫外分光光度計、紅外分光光度計、熒光分光光度計、原子吸收分光光度計；
15）比色計：濾光光電比色計、熒光光電比色計；
16）血球計數(shù)器：電子血球計數(shù)器。